黎氏哮喘I号方对哮喘小鼠嗜酸细胞凋亡的影响

摘要

目的：
　　研究黎氏哮喘I号方对哮喘小鼠模型肺组织EOS凋亡及其表面Fas和Bcl-2蛋白表达的影响，从细胞凋亡的角度探讨哮喘I号方治疗哮喘的作用机理，并为本方及中成药小儿喘咳液的推广应用及进一步研究提供实验依据。
　　方法：
　　将60只符合实验标准的SPF级雄性KM小鼠随机分为6组：正常组、哮喘模型组、地塞米松组、哮喘I号方低剂量组、哮喘I号方中剂量组、哮喘I号方高剂量组，每组10只。采用卵蛋白(OVA)腹腔注射致敏与雾化吸入激发的方法建立小鼠支气管哮喘模型。正常组采用生理盐水代替OVA，处理程序同哮喘模型组。各组小鼠均于末次激发结束后24h处死，分别行支气管肺泡灌洗及肺组织切片，取支气管肺泡灌洗液计数白细胞总数及嗜酸性粒细胞（EOS），并对各组小鼠肺组织进行病理形态学观察，采用TUNEL法检测肺组织中嗜酸性粒细胞凋亡情况，免疫组织化学方法观察肺组织中Fas和bcl-2蛋白的表达情况。结果采用统计软件SPSS13.0进行数据统计分析处理。
　　结果：
　　1.经腹腔注射卵蛋白并雾化吸入卵蛋白可明显增加小鼠气道高反应性和气道炎症，在造模成功后用哮喘I号方治疗可明显改善小鼠气道高反应性和气道炎症。
　　2.哮喘I号方高剂量组BALF中白细胞、EOS浸润明显减少，与哮喘模型组比较具有显著性差异（P＜0.01），与地塞米松组相当（P＞0.05）。病理结果显示：哮喘组具有典型的支气管及肺组织炎性病变，哮喘I号方各组的炎症病变均有所减轻，以高剂量组明显。
　　3.哮喘I号方各组凋亡指数均明显升高，高剂量组效果明显优于低剂量组和中剂量组（P＜0.01），同时也较地塞米松组明显（P＜0.01）。
　　4.与模型组比较，哮喘I号方各组均明显促进Fas蛋白表达（P＜0.01）；与对照组比较，低、中剂量组作用相当，高剂量组则明显优于地塞米松组。哮喘I号方对促进Fas蛋白的表达成明显的剂量关系，高剂量组明显优于低、中剂量组。经线性相关分析得知：各组小鼠肺组织中Fas蛋白的表达与EOS的凋亡之间存在明显的正相关(r=0.483，P＜0.05)。
　　5.与模型组比较，哮喘I号方各组Bcl-2蛋白的表达均明显减少（P＜0.05，P＜0.01）；与对照组比较，低剂量组统计学显示具有差异，中高剂量组则无差异；哮喘I号方对Bcl-2的表达有明显的抑制作用，且成剂量依赖关系，随着剂量的升高效果更明显。但线性相关分析发现：各组小鼠肺组织中Bcl-2蛋白的表达与EOS的凋亡之间无相关性(r=-0.211，P＞0.05)。
　　结论：
　　1.哮喘I号方能减轻哮喘模型小鼠的大、小气道及肺组织的炎症。
　　2.哮喘I号方可促进哮喘小鼠肺组织EOS的凋亡,且成明显的剂量依赖关系。
　　3.哮喘I号方可促进哮喘模型小鼠肺组织Fas蛋白的表达，抑制Bcl-2蛋白表达的作用，且成剂量依赖关系。

目录

声明

引言

第1章 文献研究

1.1 病名演变

1.2小儿哮喘病的病因病机研究

1.3小儿哮喘病的中医治疗

2 现代医学对小儿哮喘的研究

2.1 现代医学对小儿哮喘的认识

2.2 现代医学对小儿哮喘的治疗

3 黎氏哮喘方的组方思路与研究概况

第2章 实验研究

一 材料与方法

1 实验动物及分组

2 主要试剂及仪器

3 哮喘模型的建立

4 药物制备及给药方法

5 标本采集及制备

6 观察指标及测定方法

7 统计学分析

二 结果与分析

1 一般症状观察

2 黎氏哮喘I号方对哮喘小鼠BALF中白细胞总数、EOS计数的影响

3 黎氏哮喘I号方对哮喘小鼠肺组织EOS凋亡的影响

4 黎氏哮喘I号方对哮喘小鼠肺组织Fas蛋白表达的影响

5 黎氏哮喘I号方对哮喘小鼠肺组织Bcl-2蛋白表达的影响

6 黎氏哮喘I号方对哮喘小鼠肺组织病理形态学的影响

7 Fas、Bcl-2 蛋白的表达与EOS凋亡的相关性分析

三 讨 论

1 小鼠支气管哮喘模型的建立及评价

2 EOS凋亡与哮喘的关系

3 Fas与EOS凋亡

4 Bcl-2与EOS凋亡

结语

参考文献

英文缩略词表

附录图片

致谢