新型抗钙化牛颈静脉带瓣管道的实验研究

摘要

目的:探索对戊二醛固定的牛颈静脉改性的新的抗钙化处理方法，以期研制出一种新型抗钙化牛颈静脉带瓣管道。评价处理后新型牛颈静脉带瓣管道的生物力学性能、在体抗钙化、抗炎性能及体内外生物相容性，初步探讨其作为右室流出道重建术中管道材料的可行性，为下一步行大体动物试验及进入I期临床试验提供理论依据。
　　方法:
　　本实验分三部分循序进行：
　　1.新型抗钙化牛颈静脉带瓣管道的制备及生物力学性能测定：（1）新型抗钙化牛颈静脉管道制备：取新鲜牛颈静脉，热缺血时间在2h以内，依次经0.6%戊二醛处理24h，0.5% Triton X-100处理48h，5%环氧氯丙烷处理24h，然后在0.3%戊二醛溶液中保存。（2）生物力学测定：牛颈静脉分为GA组（单纯戊二醛固定）、EC+Tr组（戊二醛联合Triton X-100、环氧氯丙烷处理）、新鲜组，利用自制热皱缩温度测定仪测定各组牛颈静脉材料热皱缩温度（n=6）；在ElectroForce力学测试机上测定各组牛颈静脉材料拉伸强度及断裂伸长率（n=8）。
　　2.体内抗钙化、抗炎性能实验研究：分别剪取 GA组和 EC+Tr组牛颈静脉管壁血管片（n=8），建立大鼠皮下包埋动物模型，8周后获取组织标本，通过大体形态及 HE染色，比较两组血管片包埋前后形态结构变化、炎性反应；用原子吸收光谱仪测定血管片组织钙含量，评价各组抗钙化性能。
　　3.体内外生物相容性评价：完全参照国家医用植入材料的评价标准，按要求制备GA组和 EC+Tr组牛颈静脉材料浸提液，通过浸提液进行溶血试验、皮内注射刺激试验、急性全身毒性试验、细胞毒性试验。
　　结果:与GA组相比，EC+Tr组牛颈静脉管道的生物力学性能、抗钙化性能及生物相容性具有明显优势，表现在:
　　（1）生物力学方面：①EC+Tr组热皱缩温度升高（86.15±0.92℃ vs82.73±1.28，P<0.05）；②EC+Tr组拉伸强度（5.31±0.14MPa vs4.52±0.56 MPa，P<0.05）及断裂伸长率%(265.1±27.8 vs237.8±17.41，P<0.05）提高。
　　（2）抗钙化、抗炎性能方面：①EC+Tr组包埋后血管片结构致密，无明显降解，炎性细胞浸润少，组织水肿程度轻；②而EC+Tr组包埋后血管片钙含量亦明显降低（51.2±2.69μg/mg vs73.2±3.82μg/mg, P<0.01）。
　　（3）生物相容性方面：①溶血试验中，EC+Tr组溶血率为2.6%，小于GA组3.7%溶血率（P<0.05），符合国家标准（<5%）；②皮内刺激试验结果，EC+Tr组PII(原发性刺激指数)为0.5，小于GA组0.87，提示刺激轻微；③急性全身毒性试验中，受试动物均未出现毒性症状；④细胞毒性试验中，EC+Tr组培养的L-929小鼠成纤维细胞经100%浓度材料浸提液处理后形态良好，增值率达87.55%，毒性评级为1级（合格），显著优于GA组结果（增值率为69.47%，毒性评级为2级，P<0.05）。
　　结论
　　1. Triton X-100、环氧氯丙烷联合改性处理戊二醛固定的牛颈静脉是一种有效的、抗钙化的牛颈静脉带瓣管道制备技术。
　　2.与单纯戊二醛处理相比， Triton X-100、环氧氯丙烷联合改性处理的牛颈静脉带瓣管道具备更优的生物力学性能和抗钙化、抗炎性能。
　　3. Triton X-100、环氧氯丙烷联合改性处理戊二醛固定的牛颈静脉带瓣管道符合国家标准，具有良好的体内外生物相容性。

目录

声明

前言

第一部分 新型抗钙化牛颈静脉带瓣管道的制备及生物力学性能评价

一、材料、试剂和实验仪器

二、实验方法

三、结果

四、讨论

第二部分 体内抗钙化、抗炎性能实验研究

一．材料、试剂和实验仪器

二、实验方法

三、结果

四、讨论

第三部分 生物相容性评价

一、材料、试剂和仪器

二、方法

三、结果

四、讨论

结论

参考文献

综述:牛颈静脉带瓣管道的抗钙化研究进展

前言

1.牛颈静脉的组织结构特性

2.牛颈静脉带瓣管道的临床应用情况

3.牛颈静脉带瓣管道的钙化机理

4.牛颈静脉带瓣管道的抗钙化处理方法

展望

参考文献

附录

主要缩写词表

附图

成果

致谢