柴胡总皂苷对小鼠部分药物代谢酶及P-糖蛋白的影响

摘要

目的：
　　主要研究柴胡总皂苷（Total Saikosaponins,TSS）对小鼠肝脏细胞色素氧化酶P450主要成员（Cyp3a、Cyp2d22、Cyp2e1和 Cyp1a2）、肝脏胞质硫酸转移酶（Sulfotransferase1A1,SULT1A1）及肠道药物转运体P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）活性及其mRNA表达的影响。
　　方法：
　　将SPF级小鼠随机分为7组，每组10只，雌雄各半。纯水对照组（10 mL·kg-1）、酮康唑组（1.8 mg·kg-1）、利福平组（40 mg·kg-1）、柴胡皂苷高、中、低、常剂量组（剂量分别为150 mg·kg-1、75 mg·kg-1、15 mg·kg-1、3 mg·kg-1）。各组小鼠给予相应供试品灌胃7 d，实验当日，对乙酰氨基酚（acetaminophen,APAP）以50mg/kg经口投予60min后小鼠断头采血，在低温环境下快速取出肝脏和小肠。用分光光度法测定血中APAP的浓度；采用差速离心法分离肝/肠微粒体和肝胞浆液，以Folin-酚法定量肝/肠微粒体和匀浆中的蛋白浓度，紫外分光光度法测定Cyp3a、Cyp2e1和SULT1A1的酶活性，高效液相色谱法测定Cyp2d22和Cyp1a2的酶活性；制备肠匀浆测定P-糖蛋白偶联的ATP酶活性；用TRIZOL法提取小鼠肝脏总RNA，并用实时荧光定量PCR仪测定Cyp3a11、Cyp2d22、Cyp2e1、SULT1A1及Abcb1b的mRNA表达量。
　　结果：
　　血中APAP浓度测定结果和P-糖蛋白偶联的ATP酶活性测定结果显示，柴胡总皂苷各剂量组与对照组之间均无显著性差异（P>0.05）；在肝脏和肠道微粒体实验中，不论以氨基吡啉还是以红霉素为底物测定Cyp3a活性，仅有柴胡总皂苷高剂量组（150mg·kg-1）的Cyp3a活性显著高于对照组（P<0.05），其他剂量组与对照组之间并无显著性差异（P>0.05）；在测定肝微粒体 Cyp2e1活性时，柴胡总皂苷高剂量组（150 mg·kg-1）和中剂量组（75 mg·kg-1）小鼠的Cyp2e1活性显著低于对照组（P<0.05或P<0.01）；在测定肝微粒体Cyp2d22活性时，柴胡总皂苷高剂量组（150 mg·kg-1）和中剂量组（75 mg·kg-1）小鼠的Cyp2d22活性显著低于对照组（P<0.05或P<0.01）；在测定肝微粒体Cyp1a2活性时，柴胡总皂苷高剂量组（150 mg·kg-1）活性明显低于对照组（P<0.01），而柴胡总皂苷低剂量组（15 mg·kg-1）和常剂量组（3 mg·kg-1）活性明显高于对照组（P<0.01）；肝胞浆液中 SULT1A1活性测定结果显示，在 pH5.5和pH6.5反应体系下，以2-萘酚为底物测定酶活性时，柴胡总皂苷高剂量组和低剂量组小鼠SULT1A1活性均明显高于纯水对照组（P<0.01或P<0.05），而以4-硝基酚为底物测定酶活性时，仅有柴胡总皂苷高剂量组 SULT1A1活性显著高于纯水对照组（P<0.01或P<0.05），且柴胡总皂苷对SULT1A1活性的诱导作用呈现剂量依赖性。实时荧光定量PCR测定结果显示，只有柴胡总皂苷在高剂量（150 mg·kg-1）时才能够明显诱导Cyp3a11和SULT1A1 mRNA在小鼠肝脏中的表达水平（P<0.01或P<0.05），该结果与酶活性测定结果一致，而柴胡总皂苷对其它目的基因的表达量没有明显影响（P>0.05）。
　　结论:
　　柴胡总皂苷对小鼠肝脏和肠道中的Cyp3a有明显的诱导作用；对肝脏Cyp2e1和Cyp2d22的酶活性具有显著的抑制作用；柴胡总皂苷在低剂量时能明显诱导 Cyp1a2的活性，而在高剂量时反而抑制其活性；对肝胞浆液中的SULT1A1具有显著的诱导作用，而对小鼠肠道P-糖蛋白的转运活性无影响。

目录

声明

引言

第一部分 文献研究

1.1 柴胡总皂苷研究概述

1.2 CYPs研究概述

1.3 硫酸转移酶的研究概述

1.4 ATP依赖型药物转运体P-糖蛋白

第二部分 实验研究

2.1 研究路线

2.2 药品与试剂

2.3 仪器

2.4 实验动物处理

2.5 P-gp的活性测定

2.6 P-gp依赖的ATP酶活性的测定

2.7 微粒体的制备

2.8 蛋白定量

2.9 肝和肠微粒体中Cyp3a酶活性的测定

2.10 肝微粒体中Cyp2e1酶活性的测定

2.11 Cyp2d22和Cyp1a2活性测定

2.12 肝脏SULT1A1的活性测定

2.13 实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）定量肝脏中目的基因

2.14 统计学处理

第三部分 实验结果

3.1 P-gp功能及其mRNA表达测定结果

3.2 Cyp3a酶活性及其mRNA表达测定结果

3.3 Cyp2e1酶活性及其mRNA表达测定结果

3.4 Cyp2d22酶活性及其mRNA表达测定结果

3.5 SULT1A1酶活性及其mRNA表达测定结果

第四部分 讨 论

第五部分 结 论

参考文献

附录

致谢