叶下珠复方联用ADV治疗LRHB的疗效及抗病毒免疫机制的研究

摘要

经过多年实验研究、临床研究、反复筛选、不断优化，本研究采用叶下珠、黄芪、三七、甘草等数种中药组成了叶下珠复方，并拟将其开发为新一代的抗乙肝病毒的新药。
　　在进行叶下珠复方的临床研究前，我们完成体外抗乙肝病毒（HBV），对 HBV转基因小鼠免疫病理模型的干预作用的实验研究，验证了其实验治疗的有效性。
　　在体外抗HBV的研究中，我们选择了2.2.15细胞作为体外模型，HBsAg、HBeAg作为药物效果的筛选靶标，通过MTT法测定药物的细胞毒性浓度，并相应计算出治疗指数来评价药物疗效。结果显示，叶下珠复方在2.2.15细胞中对HBsAg分泌抑制的治疗指数为8.4.因此，叶下珠复方在体外能高效、低毒的抑制HBV的分泌HbsAg和HBeAg。
　　叶下珠复方中、大剂量及ADV在Tg鼠血清HBsAg阴转率分别在给药后第10天、第21天、停药后3天进行比较，差异均无显著性意义，ADV具有减少HBV Tg鼠血清HBV-DNA载量的作用。但停药3天有反跳。叶下珠复方大、中剂量组均有降低HBV Tg鼠血清HBV-DNA载量的作用，尤其以大剂量组效果明显，虽然没有减少到ADV组水平，但治疗前后差异有显著性意义，且在停药后无明显反跳现象，说明叶下珠复方作用持久、平稳。模型组Tg鼠肝脏病理改变类似于临床轻度肝炎表现，随着叶下珠复方剂量的增大，炎症得以缓解。大剂量组的肝板排列整齐，无纤维组织增生，但中央静脉周围轻度围管浸润。叶下珠复方中、大剂量和ADV均能减少肝组织中HbcAg表达，尤其大剂量组明显。叶下珠复方能够上调CD3+、CD4+、CD4+/CD8+，下调CD8+ T细胞比值水平，具有正向T淋巴细胞免疫调节作用，尤其以大剂量组效果明显。ADV也具有提高HBV转基因小鼠细胞免疫功能（如CD3+百分比），但作用相对叶下珠复方弱。运用大、中、小剂量叶下珠复方和ADV均能提高HBV转基因小鼠血清IL-2、TNF-γ含量，与模型组相比有显著的差异。且运用大、中剂量叶下珠复方治疗后IL-2、TNF-γ水平已高于正常对照组。叶下珠中剂量组CD3+、TNF-γ与给药前后HBV-DNA载量的减少呈显著正相关，叶下珠复方大剂量组CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的变化与给药前后HBV-DNA减少呈显著正相关。
　　叶下珠复方联合阿德福韦酯（ADV）治疗拉米夫定耐药肝炎（LRHB）52周， ALT复常率、HBV-DNA阴转率、HBeAg阴转率均显著优于单纯使用ADV组，且差异显著（P＜0.05或P＜0.01）。治疗52周，叶下珠复方联用ADV完全应答率（CR）为25%,显著高于ADV组（10%），X2=9.07,P＜0.01。叶下珠复方联合ADV组治疗52周，患者CD4+百分比和NK细胞均增加，CD3+百分比增加，而两组CD8+百分比减少，并与HBV-DNA载量的减少呈显著正相关。HBV特异型CD8+T细胞用于破坏感染肝细胞，能清除肝内HBV、从而减少细胞内HBV数目，说明叶下珠复方联合ADV能更好改善LRHB患者T淋巴细胞亚群的异常及提高NK细胞的活性，提高抗病毒的疗效。同时能调节免疫功能，使免疫低下或免疫紊乱的调整到正常，显示出较好的抗HBV效果。

目录

声明

前言

第一部分 文 献 研 究

1.中医药治疗慢乙肝进展

2、叶下珠治疗慢性乙型肝炎研究进展

3. 核苷类药物治疗

4 免疫调节治疗

5 中药在抗HBV病毒研究的进展

6. 乙肝病毒感染的检测方法及YMDD变异检测方法的最近研究进展

第二部分 实 验 研 究

1. 叶下珠复方体外抗乙肝病毒的作用

2. 叶下珠复方对HBV转基因小鼠的抗病毒和免疫调节作用

3.叶下珠复方治疗CHB的疗效

4 叶下珠复方联合阿德福韦酯治疗拉米夫定耐药性CHB的疗效

第三部分 全 文 结 论

参考文献

附 录

缩略词表

附录1各药物对HBV Tg鼠脾T淋巴细胞亚群的影响变化图

附录2各药物对HBV Tg鼠肝组织病理学的影响病理图片

附录3各药物治疗拉米夫定耐药（LRHB）前后T细胞亚群变化图

致谢