补中益气汤治疗“脾气虚证”的代谢组学及药效研究

摘要

目的: 从代谢组学角度，研究慢性浅表性胃炎“脾气虚证”患者及其经补中益气汤治疗后的代谢轮廓，同时结合临床疗效观察，寻找与CSG“脾气虚证”及补中益气汤作用相关的代谢标志物。进一步结合代谢组学的研究结果，重点选取与糖代谢相关的调控环节，对与之消化、代谢相关物质进行更为深入的探讨，以期从代谢层面阐释补中益气汤的科学内涵，为该方的合理应用提供科学依据。为从系统生物学水平探讨中医“证”的本质及为临床诊断治疗CSG疾病提供客观依据。 方法: ①补中益气汤治疗慢性浅表性胃炎脾气虚证的代谢组学研究 分别收集健康志愿者、慢性浅表性胃炎(CSG)脾气虚证患者及其经补中益气汤治疗后第4周及第8周的尿液进行核磁共振氢谱(1H-NMR)检测并建立相应的代谢指纹谱，使用多变量统计分析方法如主成分分析(PCA)、偏最小二乘判别分析(PLS-DA)研究慢性浅表性胃炎脾气虚证患者及其给药后的代谢物谱差异，并通过变量重要性投影(VIP)、单变量统计分析方法（t检验）筛选相关的生物标志物。 ②补中益气汤对脾气虚证大鼠糖代谢相关环节的药理作用研究 以“五味偏食+游泳力竭+控制饮食”多因素法建立脾气虚证大鼠模型，并随机分组为补中益气汤组、2倍黄芪组、1/2倍黄芪组和脾气虚模型组，分别给予相应的药物治疗。实验过程观察各组大鼠生物学体征变化，并于实验结束后比较各组大鼠胃黏膜氢钾ATP酶(H+/K+ATPase)、肝组织葡萄糖激酶(GK)及血清淀粉酶(AMS)、乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)和异柠檬酸脱氢酶(IDH)活性差异。 成果: 本实验研究表明:①慢性浅表性胃炎脾气虚证患者主症中体倦乏力、大便异常及次症中面色萎黄、神疲懒言、口淡不渴等5个症状的症候积分及出现频率最高，PCA分析显示健康志愿者和CSG脾气虚证患者2组样本代谢物可见明显的分组趋势，而进一步的PLS-DA分析显示2组样本在PLS-DA得分图上显现出清楚的分离状态，说明脾气虚证患者与健康志愿者之间明显存在代谢产物的差异，并在尿液中筛选得到9种差异代谢产物，主要体现为脾气虚证患者尿液中牛磺酸、葡萄糖含量升高，而谷氨酸、蛋氨酸、甘氨酸、肌酐、α-酮戊二酸含量降低。 ②相比治疗前(23.6±8.0)，补中益气汤治疗第4周(12.9±6.3)及第8周(8.9±4.2)患者临床症候有所改善（P＜0.05），尤以治疗8周后效果显著。PCA分析显示，补中益气汤给药前后及健康志愿者4组样本代谢物可见一定的分组趋势，且给药后患者尿液的代谢轨迹均向健康志愿者靠近，但治疗4周与治疗8周整体尿液代谢表型差异不大。PLS-DA显示补中益气汤治疗前后患者尿液代谢表型有明显差异，并在尿液中鉴定了与补中益气汤治疗相关的10种生物标志物，主要体现为给药后甲基琥珀酸、α-酮戊二酸、β-羟基丁酸、缬氨酸、酪氨酸、肌酐、苯乙酰甘氨酸、马尿酸含量升高，而葡萄糖、尿苷含量降低。 ③“五味偏食+控制饮食+游泳力竭”多因素法建立的脾气虚证模型大鼠表现为血清AMS、LDH水平低下，胃黏膜H+/K+ ATPase、肝组织GK活性升高，而SDH、IDH则无明显变化。经药物治疗后，补中益气汤组大鼠血清AMS、LDH水平升高（P＜0.05)，胃黏膜H+/K+ATPase、肝组织GK活力降低（P＜0.05），2倍黄芪组在AMS、H+/K+ATPase、LDH、GK活力方面亦有所改善，但没补中益气汤明显，而1/2倍黄芪组则变化不大(P＞0.05);同时各组大鼠血清SDH和IDH活性无统计学差异（P＞0.05）。 结论: 慢性浅表性胃炎脾气虚证存在氨基酸分解代谢异常、三羧酸循环抑制，并伴随着一定肝肾功能损伤。补中益气汤能改善慢性浅表性胃炎脾气虚证患者体倦乏力、神疲獭言等瘟候的作用机制可能与其提高机体能量代谢，尤其是对糖代谢的调节密切相关。补中益气汤能改善脾气虚证消化吸收功能低下的状态，改善脾气虚证大鼠的无氧氧化代谢状况及调节机体葡萄糖水平，并通过控制胃酸分泌量而减少食醋所致脾气虚大证鼠胃肠粘膜的损害，尤以黄芪用量30g为佳。但对三羧酸循环的影响则有待进一步研究。

目录

声明

摘要

引言

第一章 文献研究

1．1 中西医对慢性浅表性胃炎的认识

1．2 补中益气汤治疗脾虚证的相关研究

1．2．1 补中益气汤治疗脾虚证的药效研究

1．2．2 补中益气汤治疗脾虚证的作用机制研究

1．3 代谢组学技术在中医药研究领域中的应用

1．3．1 在中医证候研究中的应用

1．3．2 在中医疾病诊断中的应用

1．3．3 在中药复方及其配伍研究中的应用

1．3．4 在中药活性成分筛选中的应用

1．3．5 在中药作用机制研究中的应用

1．3．6 在中药毒性评价研究中的应用

1．4 小结

第二章 实验研究

1．1 补中益气汤治疗慢性浅表性胃炎脾气虚证的代谢组学研究

1．1．1 临床资料

1．1．2 实验方法

1．1．3 结果与分析

1．1．4 讨论

1．2 补中益气汤对脾气虚证大鼠糖代谢相关环节的药理作用研究

1．2．1 材料与方法

1．2．2 结果与分析

1．2．3 讨论

结语

参考文献

附录

附录1：脾气虚证症状分级量化表

附录2：英文缩略语

在校期间发表论文情况

致谢