淫羊藿和巴戟天中药提取物对中国恒河猴不同极化条件下原代巨噬细胞基因表达影响的研究

摘要

目的:
　　探讨中药淫羊藿、巴戟天提取物对恒河猴单核衍生的巨噬细胞在不同极化条件下基因表达的影响，分析这两种中药可能的免疫调节的作用机制。
　　方法:
　　密度梯度离心法分离中国恒河猴外周血单个核细胞(PBMCs)，采用贴壁法分离出单核细胞，并以粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)刺激5天以使单核细胞分化成巨噬细胞，随后不加入极化因子形成M0型巨噬细胞，以干扰素γ(IFN-γ)或地塞米松继续培养2天诱导巨噬细胞极化为M1和M2c表型，同时分别加入淫羊藿、巴戟天提取物进行干预，随后提取mRNA并逆转录后，以实时荧光定量PCR检测CD4、FoxP3、CTLA-4、CCR5、IDO、IL-10、TGF-β等基因表达量，以GAPDH为参照基因，与空白组进行对比。
　　结果:
　　与空白对照组相比，加入巴戟天提取物培养的M0巨噬细胞基因表达上调不明显;经淫羊藿提取物培养的M0巨噬细胞，CCR5基因表达量上调4.21倍，TGF-β上调7.66倍，而CD4、CTLA-4、FoxP3、IL-10、IDO的基因表达无明显变化。经淫羊藿提取物刺激的M1型巨噬细胞，IL-10的表达量上调11.83倍，FoxP3上调4.55倍，IDO、CCR5、CD4、CTLA-4无明显变化，TGF-β未测出;而由巴戟天提取物刺激的M1型巨噬细胞，CTLA-4基因表达量上调3.22倍，FoxP3上调3.69倍，CCR5、CD4、IL-10、IDO均无明显变化，TGF-β未测出。经淫羊藿提取物培养刺激的M2c型巨噬细胞，CCR5基因增加5.94倍，TGF-β基因增加3.53倍，CTLA-4、FoxP3、IDO、IL-10等基因无明显变化，经巴戟天提取物刺激的M2c型巨噬细胞，CCR5基因增加6.43倍，CTLA-4基因增加3.28倍，IL-10基因增加3.76倍，TGF-β基因增加11.05倍，CD4基因增加3.77倍，FoxP3和IDO两个基因无明显变化。
　　结论:
　　经淫羊藿提取物培养的M0型巨噬细胞，则能够上调CCR5和TGF-β的基因表达，呈现出促炎、促纤维化的作用。经淫羊藿和巴戟天提取物培养后，M1型巨噬细胞能上调IL-10、FoxP3、CTLA-4等抑炎、抑纤维化基因表达，减轻炎症反应和组织纤维化，有利于组织结构的维持和保护。通过淫羊藿和巴戟天提取物培养后，M2c型巨噬细胞的CCR5、CD4和TGF-β基因表达大量增加。表现出促炎和促纤维化的免疫调节作用。总结本实验的结果，淫羊藿和巴戟天提取物通过对不同极化条件下的巨噬细胞基因表达影响的不同，发挥促炎和抑炎、促纤维化和抑制纤维化的双向调节作用。

目录

声明

摘要

引言

第一章 文献研究

第一节 淫羊藿、巴戟天提取物以及其复方制剂的研究现状

一、淫羊藿提取物的研究现状

二、巴戟天提取物研究现状

三、中药复方“喘可治”研究现状

第二节 巨噬细胞研究现状

一、巨噬细胞的组织分布

二、巨噬细胞亚群表型和功能

三、巨噬细胞激活机制

四、巨噬细胞极化的现代假说

五、巨噬细胞和组织稳态

六、巨噬细胞和组织损伤

七、巨噬细胞和疾病的关系

第二章 实验材料与实验方法

一、实验动物

二、主要仪器和试剂

三、实验方法

第三章 实验结果与讨论

结语

参考文献

在校期间发表论文情况

致谢