基于NF-κB通路加味桃核承气汤及其化裁方防治糖尿病大血管病变的实验研究

摘要

糖尿病(diabetes mellitus，DM)是一种在遗传和后天的饮食习惯、生活方式、环境等因素共同作用下形成的一种慢性、综合性疾病，糖代谢紊乱是其主要表现形式。糖尿病大血管病变是2型糖尿病最为多见的慢性并发症之一，也是2型糖尿病致残、致死的主要原因。动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是糖尿病大血管的主要病理改变，预防和延缓其发生和进展有非常重要的社会意义和经济价值。目前很多研究结果证实，炎症反应是糖尿病大血管病变的重要发病机制，而NF-κB与炎症反应密切相关。在辨证论治、整体观等理论的指导下，中医药在防治糖尿病及其并发症方面有着独特的优势。中医学对消渴病及其并发症的认识源远流长，在《皇帝内经》就已经有相关的记载，历代医家对消渴病的认识在不断更新和发展。“阴虚燥热”为消渴病机的传统认识，现代医家结合现代人的饮食习惯及生活方式，认为“气阴两虚”才是2型糖尿病的基本病机，大血管并发症为2型糖尿病的一种兼证，是在气阴两虚基础上导致阳气郁滞，浊毒瘀血生成而出现的一种病理性改变。加味桃核承气汤是我院熊曼琪教授及其研究团队在经方桃核承气汤的基础上加减化裁而成，应用于2型糖尿病及其并发症的防治，疗效显著，部分作用机制已被许多相关研究所证实。
　　实验研究:
　　目的:
　　立足通阳学说，探讨加味桃核承气汤及其化裁方（化裁1号方、化裁2号方）防治2型糖尿病大血管病变的中医学原理;并基于炎症反应及NF-κB信号通路，借助动物实验及多种现代生物学技术，从分子生物学层面探讨加味桃核承气汤及其化裁方对2型糖尿病大血管病变的影响，以期发现其防治糖尿病大血管病变的作用机制及最佳配伍，进一步拓宽加味桃核承气汤的应用范围，为2型糖尿病大血管病变的防治提供有效的中医药选择。
　　方法:
　　120只雄性SD大鼠，适应性喂养1周后，用随机数字表法分出10只大鼠作为正常组，予普通饲料喂养;剩下110只为造模组，予高糖高脂饲料喂养。6周后，从造模组随机抽出21只大鼠分成3组，以35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg三种剂量一次性腹腔注射STZ进行预造模，72 h后测尾尖空腹血糖≥11.1 mmol/L并伴糖尿病症状者，判定为2型糖尿病模型。观察大鼠血糖值及死亡情况，择日对剩下的造模组大鼠以40 mg/kg剂量一次性腹腔注射STZ，正常组大鼠以等量柠檬酸缓冲液腹腔注射。大鼠成模后，继续观察2周，去除死亡及血糖未达标的大鼠，共成模74只。将成模大鼠用随机数字表法分为2型糖尿病模型组，二甲双胍组，加味桃核承气汤原方组、化裁1号方组、化裁2号方组。二甲双胍组按0.156g/kg灌服二甲双胍混悬液，加味桃核承气汤原方组、化裁1号方组、化裁2号方组按5.4g/kg灌服相应药液，剩下的两组（正常组、模型组）给予等量蒸馏水灌服。实施药物干预共8周。实验期间观察大鼠的一般情况，每隔4周测大鼠体重、摄食量、饮水量及尾尖FBG，实验结束时测FINS，计算Homa-IR;并测HbAIc，TC、TG、HDL-C、LDL-C等血糖血脂指标;Elisa法测血清IL-6、TNF-a的含量，光镜观察胸主动脉病理形态，免疫组化法观察胸主动脉NF-κB、MCP-1、VCAM-1的染色情况，Western blotting法检测各组大鼠胸主动脉NF-κB、VCAM-1蛋白的表达、RTQ-PCR法检测各组大鼠胸主动脉NF-κB、MCP-1、VCAM-1 mRNA的表达。
　　结果:
　　1、体重、饮食方面:较模型组，治疗4周，各干预组在体重、饮水量、摄食量方面均有改善(P＜0.01)，组间无明显差异（P＞0.05）;治疗8周，化裁2号方组与二甲双胍组在体重及饮水量上无明显差异（P＞0.05），较原方组、化裁1号方组有差异(P＜0.01)，原方组、化裁1号方组无明显差异（P＞0.05）;原方组、化裁1号方组、化裁2号方组在饮食量上无明显差异（P＞0.05）。
　　2、糖脂代谢方面，治疗4周，原方组除外，各干预组FBG较模型组均有改善(P＜0.01)，其中，化裁1号方组较原方组血糖显著下降P＜0.05），较化裁2号方组、二甲双胍组无明显差异（P＞0.05）;治疗8周，化裁2号方组空腹血糖与二甲双胍组无明显差别（P＞0.05），但较原方组、化裁1号方组显著降低(P＜0.01)，原方组、化裁1号方组组间无明显差异(P＞0.05)。治疗8周后，较模型组，原方组、化裁1号方组、化裁2号方组、二甲双胍组糖化血红蛋白水平明显改善(P＜0.01);化裁2号方组、二甲双胍组间糖化血红蛋白水平无明显差异(P＞0.05)，但较化裁1号方组、原方组均明显降低(P＜0.01)，化裁1号方组较原方组降低(P＜0.05)。较模型组，四个药物干预组Homa-IR均有改善（P＜0.01），二甲双胍组较化裁1号方组无明显差异（P＞0.05），较原方组、化裁2号方组显著下降（P＜0.01），原方组与化裁2号方组间无明显差异(P＞0.05)。血脂方面，各治疗组大鼠TC、TG、LDL-C均较模型组显著降低（P＜0.01），HDL-C明显升高（P＜0.01）;化裁2号方组、化裁1号方组、原方组组间LDL-C水平无明显差别（P＞0.05），二甲双胍组较原方组明显降低(P＜0.01)，较化裁1号方组、化裁2号方组无明显差异（P＞0.05）;化裁2号方组、二甲双胍组组间HDL-C水平无明显差异（P＞0.05），较原方组、化裁1号方组明显升高（P＜0.01），化裁1号方组较原方组升高(P＜0.05);化裁2号方组较原方组、化裁1号方组TC显著降低(P＜0.05)，较二甲双胍组无明显差异（P＞0.05），原方组较化裁1号方组TC无明显差别（P＞0.05）;化裁2号方组TG较原方组、化裁1号方组、二甲双胍组明显降低(P＜0.01)，化裁1号方组较二甲双胍组无明显差异（P＞0.05），较原方组明显降低（P＜0.01）;治疗8周后TG、TC较正常组明显升高(P＜0.01)。
　　3、血清炎症因子水平:较正常组，模型组IL-6、TNF-a水平明显升高(P＜0.01)。
　　结论:
　　1.立足通阳学说，以“阴虚阳郁”再释糖尿病大血管病变之病机，加味桃核承气汤借“益气养阴、化瘀泻浊”之法行“通阳”之用，从而有效防治糖尿病大血管并发症。
　　2.加味桃核承气汤及其化裁方可改善T2DM多饮、多食、消瘦症状，有效降低空腹胰岛素水平及胰岛素抵抗指数，改善胰岛素抵抗，同时能降低空腹血糖和糖化血红蛋白，纠正脂代谢异常，从而改善糖脂代谢紊乱。针对T2DM大血管病变，加味桃核承气汤及其化裁方能改善其低度炎症反应，具有防治大血管并发症的作用。其作用机制可能是通过抑制主动脉NF-κB蛋白和mRNA的表达，抑制NF-κ B p65的活化，降低IL-6和TNF-a的血清含量，抑制MCP-1mRNA、VCAM-1 mRNA及蛋白的表达水平而实现。此外，本实验还发现，加味桃核承气汤中桂枝药量翻倍并加细辛，抗炎作用较加味桃核承气汤原方更强。

目录

声明

摘要

引言

第一章 文献研究

第一节 中医学对糖尿病大血管病变的研究进展

一、祖国医学对于消渴及其血管并发症的症状描述

二、古代医家对消渴病因病机的探讨

三、现代医家对2型糖尿病大血管病变病因病机的认识及论治

第二节 现代医学对糖尿病大血管病变的研究进展

一、糖尿病大血管病变的流行病学

二、糖尿病大血管病变的危险因素

三、糖尿病大血管病变的发病机制

第三节 低度炎症反应、核转录因子NF-κB与2型糖尿病大血管病变

一、低度炎症反应与2型糖尿病大血管病变

二、NF-κB与2型糖尿病大血管病变

三、2型糖尿病大血管炎症反应的药物治疗

第二章 实验研究

第一节 前言

一、加味桃核承气汤的研究进展

二、基于通阳学说加味桃核承气汤防治糖尿病大血管的可行性探讨

第二节 加味桃核承气汤及其化裁方对糖尿病大血管病变大鼠糖脂代谢的影响

一、材料

二、方法

三、结果

四、讨论

第三节 加味桃核承气汤及其化裁方对糖尿病大血管病变大鼠血清TNF-a、IL-6的影响

一、材料

二、方法

三、结果

四、讨论

第四节 加味桃核承气汤及其化裁方对糖尿病大血管病变大鼠胸主动脉内皮组织光镜病理形态学的影响

一、材料

二、方法

三、结果

四、讨论

第五节 加味桃核承气汤及其化裁方对糖尿病大血管病变大鼠胸主动脉NF-κB、VCAM-1、MOP-1蛋白表达的影响

一、材料

二、方法

三、结果

四、讨论

第六节 加味桃核承气汤及其化裁方对糖尿病大血管病变大鼠胸主动脉NF-κB、MCP-1、VCAM-1基因表达的影响

一、材料

二、方法

三、结果

四、讨论

五、小结

结语

参考文献

附录

在校期间论文发表情况

致谢