脾气虚证患者唾液淀粉酶活性及其相关指标的研究

摘要

目的:
　　既往研究根据“脾主涎”等中医理论发现脾气虚证患者唾液淀粉酶(salivaryalpha-amylase，sAA)活性比值（酸刺激后/酸刺激前）较健康者明显下降，该指标1993年被卫生部颁布的《中药新药临床研究指导原则》列入脾气虚证疗效评价的参考指标，是为数不多的得到政府部门认可的证候微观指标。以sAA活性改变为切入点，从同病异证和异病同证角度探讨脾气虚证患者sAA活性及其相关指标（唾液pH值、唾液流率、总蛋白及离子浓度等）改变情况，进一步丰富中医“脾主涎”的科学内涵，并观察脾气虚证患者sAA活性及相关指标合参对临床检出率的影响。
　　方法:
　　一、运用EP管自然流出法、口中转动棉柱法和口中咀嚼棉柱法分别采集55例健康志愿者酸刺激前、后的唾液，检测并比较sAA活性及总活性、唾液流率指标变化情况，为筛选较优的唾液采集方法提供依据。
　　二、采集广州中医药大学第一附属医院脾胃病科门诊及住院部101例慢性浅表性胃炎(chronic superficial gastritis，CSG)和60例重症肌无力(myasthenia gravis，MG)患者酸刺激前和酸刺激后的唾液，CSG患者纳入的证型主要为脾气虚、脾虚湿热和肝胃不和3个证型（分别为36、40和25例），上午9:00～11:00采集;MG患者纳入的证型主要为脾气虚、脾虚湿热和脾肾两虚3个证型（分别为32、23和5例），晨醒30 min内采集。
　　三、招募筛选青中年健康志愿者并采集其酸刺激前和酸刺激后的唾液，采集时间分晨醒30 min内和上午9:00～11:00（早餐1h后）。
　　四、检测受试者sAA活性、唾液流率、pH值、总蛋白浓度、Ca2+及Cl-浓度。sAA活性采用Bernfeld法，唾液流率采用称重法计算，pH值使用pH计检测，总蛋白浓度采用BCA蛋白定量试剂盒检测，Ca2+及Cl-浓度采用离子定量试剂盒检测。
　　五、与健康对照组比较sAA活性及其相关指标的改变情况，尝试对sAA活性及相关指标进行多指标合参并评价其临床检出率情况。
　　结果:
　　一、唾液样品采集方法的优化:EP管自然流取法与口中转动棉柱法的sAA活性及总活性和唾液流率在酸刺激后均升高，反映了健康者唾液腺对酸的正常应激能力，且两者在酸刺激后各指标升高的检出率较为接近，其中又以口中转动棉柱法有结果客观、可平行采集足量唾液的优势;而口中咀嚼棉柱法的结果与前两种方法差异较大，各指标比值升高的检出率明显低于前两者，未能客观反映健康者酸刺激后sAA活性升高的现象。因而选择口中转动棉柱法作为后续研究唾液样品的采集方法。
　　二、脾气虚证患者与健康者唾液指标检测:
　　（一）CSG患者与健康者比较:
　　(1)酸刺激后，健康者sAA活性、sAA总活性、流率和pH值升高，反映了健康者对酸刺激的正常应激能力;唾液总蛋白浓度酸刺激后降低，可能是酸刺激后唾液流率升高，总蛋白浓度相对降低所致。(2) CSG及其脾气虚证和脾虚湿热患者酸刺激后sAA活性降低，并且sAA活性比值低于健康者，说明CSG及其脾虚患者唾液腺对酸的应激能力降低，再次重复验证既往研究结果。肝胃不和患者sAA活性及总活性比值高于脾气虚证和脾虚湿热证患者，与健康者无明显差异;唾液流率、pH值、总蛋白浓度、Ca2+及Cl-浓度在证型间无明显差异;说明sAA活性改变为脾虚患者相对特异性指征。(3)酸刺激前、后，CSG及其三证型患者唾液流率均低于健康者，总蛋白浓度、Ca2+及Cl-浓度均高于健康者，说明患者唾液成分浓度相对于健康者已发生改变，提示可能与患者植物神经系统功能紊乱有关。(4)酸刺激后脾气虚证患者唾液pH值降低的例数（16例）高于健康者（2例），说明脾气虚证患者唾液缓冲能力降低。
　　（二）MG患者与健康者比较:
　　(1) MG及其脾气虚证患者酸刺激后sAA活性降低，并且sAA活性比值和sAA总活性比值均低于健康者，说明MG及其脾虚患者唾液腺对酸的应激能力降低，再次重复验证既往研究结果。MG脾气虚证患者sAA活性改变与CSG脾气虚证患者表现类似，说明sAA活性改变为脾气虚证患者普遍出现的现象。MG及其脾气虚证和脾虚湿热患者酸刺激前sAA活性高于健康者，提示在基础状态下MG脾虚患者交感神经偏亢。(2)MG及其脾气虚证患者唾液流率酸刺激前后均低于健康者，总蛋白浓度、Ca2+及Cl-浓度高于健康者，说明患者唾液成分浓度相对于健康者已发生改变，再次提示可能与患者植物神经系统功能紊乱有关。(3)酸刺激后，脾气虚证患者唾液pH值降低例数(17例)多于健康者（6例），pH值比值低于健康者，说明脾气虚证患者唾液缓冲能力降低，这与CSG脾气虚证患者表现类似，而MG脾气虚证患者出现率更高，可能与MG病理改变相对更严重有关。(4)在脾气虚证和脾虚湿热证之间各指标均无差异，提示可能是MG患者以脾气虚弱为本，所以证型在指标上未表现明显差异。(5) CSG与MG脾气虚证患者sAA活性比值均较健康者降低，重复证实了sAA活性比值降低可能是脾气虚证患者的相对共性表现，目前结果表明，两种疾病脾气虚证患者的唾液分泌可能存在相似的病理生理改变。
　　结论:
　　口中转动棉柱法采集唾液样品简便、可靠，可供后期研究者继续选用。本研究根据中医理论“脾主涎”证实了CSG和MG脾气虚证患者不仅仅表现在sAA活性异常这个单一的指标上，还表现在sAA总活性、唾液流率、pH值、总蛋白浓度、Ca2+和Cl-浓度这些指标改变上，为丰富“脾主涎”内涵提供了参考。脾气虚证和脾虚湿热患者可能均存在植物神经系统紊乱和唾液腺对酸的应激能力降低的病理表现。除了sAA活性比值，唾液pH值比值改变对于脾气虚证可能也有一定参考价值。将sAA活性、唾液流率和pH值进行合参后在脾气虚证的检出率相较以往单用sAA活性指标提高了约11.00％，但由于本研究的例数有限，多指标合参的结果尚有待后续进一步验证。

目录

声明

论文说明

摘要

引言

第一章 文献研究

第一节 脾气虚证的研究进展

一、脾的生理病理研究

二、脾气虚证的相关研究

三、脾气虚证病证结合研究进展

第二节 “脾主涎”及唾液分泌相关研究

一、“脾主涎”的中医理论认识

二、唾液分泌的相关研究进展

三、与sAA活性相关的其他唾液指标

四、脾气虚证与sAA活性及唾液相关指标研究的重点与难点

第二章 临床研究

第一节 受试者基本概况

一、纳入标准

二、排除标准

三、受试者基本情况

第二节 脾气虚证患者sAA活性改变的研究

一、材料与方法

二、结果与分析

三、小结

第三节 脾气虚证患者唾液流率及pH值的研究

一、材料与方法

二、结果与分析

三、小结

第四节 脾气虚证患者唾液总蛋白浓度的研究

一、材料与方法

二、结果与分析

三、小结

第五节 脾气虚证患者唾液Ca2+和Cl-浓度的研究

一、材料与方法

二、结果与分析

三、小结

第六节 讨论

一、从sAA及唾液相关指标探讨“脾主涎”

二、确立口中转动棉柱法采集唾液样品

三、慢性浅表性胃炎(CSG)与重症肌无力(MG)患者唾液指标改变情况

四、多指标合参有助于脾气虚证研究

结语

创新性、不足与展望

参考文献

附录

在校期间发表论文情况

致谢