乌梅喷雾剂促进唾液腺细胞自噬防治放射性口干症的机制研究

摘要

目的:
　　本研究拟通过放射性唾液腺损伤大鼠模型，观察乌梅喷雾剂对放射性唾液腺损伤大鼠体重、唾液分泌功能的影响，分析活体组织的病理形态，研究乌梅喷雾剂对颌下腺腺泡细胞和对腺泡细胞自噬相关基因及蛋白表达的影响，探讨乌梅喷雾剂对放射性损伤后唾液腺功能、结构、分子机制的影响，为临床应用开发奠定基础。
　　方法:
　　经动物伦理委员会同意选取140只健康SPF级雄性6～7周Wistar大鼠，体重约170～210g。随机分为对照组、模型组、阴性对照组、阳性对照组、实验组，每组28只。单一剂量18Gy颌下腺区照射,建立放射性唾液腺损伤大鼠模型，以生理盐水喷雾剂为阴性对照，以匹罗卡品喷雾剂为阳性对照，乌梅喷雾剂为实验组，于照射后每天三次口腔喷雾干预处理，对照组正常喂养外不作干预，模型组照射后正常喂养外不作干预。于照射后第1、7、14、28天，每天每组取7只，记录大鼠体重，探讨乌梅喷雾剂对放射性唾液腺损伤大鼠体重的影响;收集大鼠唾液，检测乌梅喷雾剂对放射性唾液腺损伤大鼠唾液分泌的影响;摘取颌下腺，采用组织切片苏木精-伊红(HE)染色，光镜观察颌下腺组织病理变化;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白质印迹法(Western blot)技术检测自噬相关因子Beclin-1、Atg5的mRNA及蛋白表达水平，从分子生物学水平检测细胞自噬水平的变化。
　　结果:
　　(1)照射后第7、14、28天，对照组体重差增加明显高于其余四组，差异具有统计学意义(P＜0.05);照射后第14、28天，实验组体重差高于模型组，差异具有统计学意义(P＜0.05)，但与阳性对照组相比，差异无统计学意义(P＞0.05)。(2)照射后第1天，各照射组唾液流率均低于对照组，但差异无统计学意义;照射后第7天，实验组与对照组、阳性对照组间差异无统计学意义，模型组与对照组、阳性对照组、实验组间唾液流率差异有统计学意义(P＜0.05)。(3) HE染色结果显示，照射后第1天，实验组、模型组、阴性对照组、阳性对照组大鼠腺体均出现轻微的萎缩，腺体细胞体积有些变小，部分发生坏死，核固缩明显，间质中可见明显的炎性细胞浸润，腺体间隔轻微的增宽等的病理改变;照射后第7、14天，实验组、阳性对照组与模型组相比，腺体细胞病理形态有所修复;照射后第28天，模型组与阴性对照组腺体存在较为严重的损伤，而实验组腺体排列规则，腺体未见萎缩，少量腺体细胞核发生固缩，腺体细胞未见明显坏死，间质中未见炎性细胞浸润，间质未见增宽，损伤腺体能明显修复了其细胞形态。(4)自噬相关基因Beclin1和Atg5在各组中均有表达;照射后第1、7、14天，实验组、模型组、阳性对照组的Beclin1基因相对表达量高于对照组，实验组与模型组的Beclin1基因相对表达量间差异无统计学意义;照射后第1、7天，实验组、模型组、阴性对照组、阳性对照组的Atg5基因相对表达量高于对照组，且具有显著性差异。(5)照射后第1、7天，实验组、模型组、阳性对照组的Beclin1蛋白表达比对照组高;照射后第1、7、14天，实验组、模型组、阴性对照组、阳性对照组的Atg5蛋白表达比对照组高，且第1、7天，实验组与模型组间Atg5蛋白表达无明显差异。
　　结论:
　　(1)乌梅喷雾剂可改善放射性唾液腺损伤大鼠的食欲，尤其在照射后第2到4周时有效提高放射性唾液腺损伤大鼠体重。
　　(2)乌梅喷雾剂能有效修复大鼠颌下腺放射性损伤后的细胞形态，但就目前研究数据并未能表明乌梅喷雾剂对放射性唾液腺损伤细胞自噬活性存在影响。
　　(3)自噬活性可能与放射性唾液腺损伤发生早期有关。

目录

声明

摘要

引言

第一章 文献研究

一、细胞自噬的定义

二、自噬相关基因

三、自噬的相关研究

第三节 祖国医学对放射性口干症的认识

一、古代医家对放射性口干症的认识

二、中医防治放射性口干症的进展

第四节 现代医学对放射性口干症的认识

一、现代医学对放射性口干症的认识

二、放射性口干症的现代医学发病机制

三、现代医学防治放射性口干症的进展

第五节 乌梅与甘草的概述

一、基于酸甘化阴理论乌梅与甘草的临床应用

二、乌梅与甘草成分分析

三、乌梅在放射性口干症中应用研究及实验研究

第二章 实验研究

一、研究对象及分组

二、造模方法

三、给药方法

四、喷雾剂制备

五、试剂及仪器

六、检测指标及方法

七、科研伦理

八、示意图

九、统计学方法

一、实验大鼠基线资料

二、唾液流率

三、颌下腺HE染色

四、RT-PCR检测自噬相关基因Beclin1，Atg5的mRNA表达

五、Western blot检测自噬相关基因Beclin1，Atg5的蛋白表达

第三章 分析与讨论

第一节 唾液腺的结构与功能

第二节 放射性口干症机理简析

第三节 乌梅喷雾剂的简述

第四节 实验结果评价与探讨

一、乌梅喷雾剂对放射性唾液腺损伤大鼠体重结果评价与探讨

二、乌梅喷雾剂对放射性唾液腺损伤大鼠分泌功能结果评价与探讨

三、乌梅喷雾剂对放射性颌下腺损伤大鼠组织学改变的评价与探讨

四、RT-PCR与Western blot实验结果讨论与分析

五、乌梅喷雾剂防治放射性口干症的创新性与可行性探讨

六、乌梅喷雾剂治疗放射性口干症作用机制与放射性唾液腺损伤未来可能探讨方向

结语

参考文献

附录

在校期间发表论文情况

致谢