基于代谢组学技术的妊娠期糖尿病中医证候的研究

摘要

目的:
　　本研究通过调查妊娠期糖尿病患者的中医证候，总结妊娠期糖尿病中医证型分布规律;同时利用代谢组学技术，寻找妊娠期糖尿病心阴虚证、气阴两虚证、未定证型血液标本的代谢标志物，分析其代谢途径，以期探索妊娠期糖尿病不同中医证型的病理特点，为妊娠期糖尿病的证型客观化、中医药治疗提供客观理论依据，并为进一步的妊娠期糖尿病中医治疗奠定基础。
　　方法:
　　1.选取2013年3月～2016年12月在广州中医药大学第一附属医院产科规范产检、分娩且资料完整的GDM孕妇430例作为GDM中医证型研究部分的研究对象。根据中华中医药学会中医诊断学分会修正的《中医常见证诊断标准》及妊娠期糖尿病症状特点制定妊娠期糖尿病《中医证候调查表》，并采用此调查表对患者中医证候群进行调查，总结妊娠期糖尿病的常见中医证型。
　　2.选取其中GDM孕妇共60例做为代谢组学研究部分的研究对象，首先按确诊时的孕周分组，分为观察1组(孕24-28周)，共29例，观察2组(孕28-32周)，共31例;再按GDM中医证型分组，分为心阴虚组，共20例，气阴两虚组，共23例，未定证型组，共17例。同期选取OGTT试验正常的孕妇19名作为正常对照组。
　　3.收集研究对象的一般情况项目(包括年龄、孕周、孕次、产次、身高、收缩压(SBP，mmHg)、舒张压(DBP，mmHg)、孕前体重，并计算体重指数(BMI=体重(Kg)/[身高(m)]2))。抽血检查，观察各研究对象的血糖[空腹(FBG)、餐后1h(1hPBG)、餐后2h(2hPBG)]、糖化血红蛋白(HbAlc)、胰岛素[空腹(FINS)、餐后2h(2hPINS)]、血脂[(甘油三酯(TG)、总胆固醇(CHOL)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]、甲状腺功能[促甲状腺激素(TSH)、游离甲状腺激素(FT4)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOab)]、血红蛋白等相关临床指标。
　　4.抽取代谢组学研究对象的空腹血液，采用UPLC-Q-TOF/MS进行代谢组学检测，使用Masslynx V4.1工作站采集谱图数据，数据导入Progenesis QI2.0、EZinfo软件分析，分别采用PCA、PLS-DA、OPLS-DA等不同模式识别方法进行分析，通过人类代谢组数据库HMDB(Human Metabolome Database)、Mass Bank、化学数据库NIST和KEGG数据库，确定差异生物标志物，分析其代谢途径。
　　结果:
　　1.GDM出现频率较高的前十位中医证素是:失眠(85.0％)、健忘(83.8％)、尿频(81.2％)、头晕(79.3％)、腰酸(78.8％)、自汗(71.3％)、水肿(58.5％)、舌淡有齿痕(55.4％)、倦怠无力(51.6％)、脉细数(50.9％)。常见中医证型有:心阴虚证、气阴两虚证、脾肾阳虚、脾虚湿困、肾阴虚。还有一部分病例因评分不足14分，归为未定证型类。
　　2.一般资料结果:GDM与正常对照组、GDM不同孕周组以及GDM三组不同中医证型间的年龄、孕周、孕次、产次、身高、BMI的差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　3.临床指标结果:
　　与正常对照组相比，GDM组的FBG、1hPBG、2hPBG升高，AST降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　在GDM不同孕周组中，与观察1组(24-28周)比较，观察2组(28-32周)中HbAlc和TG升高，差异有统计学意义(P＜0.05)，而FBG、1hPBG、2hPBG、FINS、2hPINS、HOMA-IR、ISI、HOMA-β、HGB、TSH、FT4、TPOab、CHOL、HDL-C、LDL-C差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　在GDM心阴虚组、气阴两虚组、未定证型组三组间，FBG、1hPBG、2hPBG、HbAlc、FINS、2hPINS、HOMA-IR、ISI、HOMA-β的差异无统计学意义(PP＞0.05);HGB、TSH、FT4、TPOab、CHOL、TG、HDL-C、LDL-C、AST、ALT间的差异无统计学意义(P＞0.05)，
　　4.代谢组学模式识别方法结果:经过PLS-DA及OPLS-DA分析，GDM心阴虚组、气阴两虚组、未定证型组及正常对照组之间能够完全分离。各组的各个积分值主要分布于椭圆形散点图(95％置信区内)的区域，无明显的交叉和重叠。
　　5.经过筛选，共发现有25种化合物与GDM的不同孕周及各中医证型的代谢有关。
　　与GDM观察1组(24-28周)相比，GDM观察2组(28-32周)11种代谢物质均呈现上升趋势，其中有8种代谢物存在统计学意义(P＜0.05)，提示明显增加，说明GDM不同孕周的人群中血液代谢物谱发生了变化。
　　与正常对照组比较，心阴虚组14种代谢物质均呈现上升趋势，其中共有12种代谢物存在统计学意义(P＜0.05)，提示明显增加;气阴两虚组则有12种代谢物质呈现上升趋势，有2种代谢物明显减少，但只有6种代谢物存在统计学意义(P＜0.05)，提示明显增加;未定证型组有13种代谢物增加，1种代谢物下降，12种代谢物存在统计学意义。这结果显示:与正常对照组比较，GDM心阴虚证、气阴两虚证、未定证型这三种证候人群体内有多个代谢物差异变化，尤其是心阴虚组证候人群较为明显。
　　GDM心阴虚、气阴两虚组、未定证型组间比较，13种代谢物质均呈现上升趋势，其中共有12种代谢物存在统计学意义(P＜0.05)，提示明显增加。此结果显示:GDM心阴虚证、气阴两虚证、未定证型三种不同证型人群的体内代谢物也有差异变化。
　　6.在两种不同类型的分组中，发现分子质量分别为782.5688、758.5691、730.5892、544.3442四种代谢物均存在差异。进行鉴定识别后，差异代谢物分别为:PC(36∶4)，磷脂酰胆碱;PC(34.2)，磷脂酰胆碱;PE(20∶1)，磷脂酰乙醇胺;LPC(22∶4)，溶血磷脂酰胆碱。
　　结论:
　　1.妊娠期糖尿病中医病性多为虚证，以阴虚为主，兼有气虚和湿郁，病位在心、脾、肾，中医证型主要以心阴虚和气阴两虚为主。另外，在我们的前期研究中还发现，脾虚湿困GDM孕妇平均年龄明显高于其它常见中医证型，而脾虚湿困证患者胰岛素抵抗程度同时也比其它各中医证型GDM患者严重，因此，在临床中，可以考虑对年龄偏大的患者通过健脾渗湿的方法，帮助改善胰岛素抵抗状态。
　　2.妊娠期糖尿病三种不同中医证型之间，无论在一般情况、肝功能、甲状腺功能等方面的差异无明显统计学意义，在血糖和血脂代谢方面也未见明显的差异，说明运用临床中常用的生化及免疫学指标，无法很好的将GDM不同中医证型区分开来，需要在其它领域进一步探索有差异的物质。
　　3.妊娠期糖尿病人群的血液代谢物谱发生变化，提示其具有代谢物质基础。GDM不同孕周之间、不同中医证型之间均存在代谢差异，主要涉及的具体代谢物有所差异。
　　4.磷脂酰胆碱[PC(36∶4)、PC(34∶2)]、溶血性磷脂酰胆碱[LPC(22∶4)]、磷脂酰乙醇胺[PE(20∶1)]等浓度变化可以考虑为GDM及其不同中医证型间潜在的代谢标志物，这些物质可能成为GDM不同中医证型间的纽带，并做为GDM早期筛查、干预与管理的指标。

目录

声明

摘要

引言

第一章 文献研究

1．1 妊娠期糖尿病的西医研究进展

1．1．1 妊娠期糖尿病概况

1．1．2 妊娠期糖尿病的发病机理

1．1．3 妊娠期糖尿病的诊治现状

1．2 妊娠期糖尿病的中医研究进展

1．2．1 妊娠期糖尿病的中医概述

1．2．2 妊娠期糖尿病中医病因病机的研究

1．2．3 妊娠期糖尿病的中医证候研究

1．3 妊娠期糖尿病代谢组学的的研究进展

1．3．1 代谢组学概述

1．3．2 代谢组学在糖尿病方面的研究状况

1．3．3 代谢组学在妊娠期糖尿病研究中的应用

第二章 GDM中医证型临床调查

2．1 研究对象

2．1．1 病例来源

2．1．2 研究标准

2．2 研究内容和方法

2．2．1 制定调查问卷

2．2．2 现场调查

2．2．3 收集证候，辨识中医证型

2．2．4 数据处理及统计学分析

2．3 研究结果

2．3．1 —般资料结果

2．3．2 中医证候情况

2．4 讨论

2．4．1 GDM患者一般临床情况分析

2．4．2 GDM患者中医证型分析

第三章 代谢组学实验研究

3．1 研究对象

3．1．1 病例来源

3．1．2 诊断标准

3．1．3 纳入标准

3．1．4 排除标准

3．1．5 —般情况资料

3．1．6 临床观察指标及其检测方法

3．2 研究方法及步骤

3．2．1 研究方法

3．2．2 实验方法

3．3 研究结果

3．3．1 临床研究结果

3．3．2 代谢组学研究结果

3．4 讨论

3．4．1 GDM患者临床生化指标检测的意义

3．4．2 代谢组学分析方法在GDM及其中医证候研究中的应用

3．4．3 GDM不同孕周间代谢标志物的分析

3．4．4 GDM不同中医证型间代谢标志物的分析

结语

参考文献

附录

在校期间发表论文情况

致谢