高酸海棠果花色苷的提取鉴定及纳米负载血液相容性研究

摘要

本文以新疆产的三种高酸海棠果为原料，用酸化的甲醇提取其中的花色苷，并用Amberlite XAD-7大孔树脂分离和SephadexLH-20葡聚糖凝胶纯化，用pH示差法分析了花色苷的含量和UPLC-ESI-MS鉴定了其中花色苷的种类。以单体花色苷C3G为研究对象，使用离子交联的方法，合成了4种负载C3G的纳米粒子体系，用TEM和TITR进行表征，并研究了在体外模拟体系中的缓释效果，并评价了他们的血液相容性和细胞毒性。得到以下主要结果与结论:
　　(1)“红勋1号”、“红勋2号”、“红勋3号”三种高酸海棠果中花色苷的含量依次为9.92、18.24和8.28 mg/100 g FW。“红勋1号”主要有两种花色苷，矢车菊素-3-葡萄糖苷和矢车菊素-3-阿拉伯糖苷，“红勋3号”主要含有矢车菊素-3-葡萄糖苷。“红勋2号”中花色苷的种类初步推测为Vitisins A（Cyanidin）和Vitisins A(Peonidin)。
　　(2)成功合成了四种负载花色苷的纳米粒子体系C3G-CS-TPP、C3G-CS-PGA、C3G-CSO-PGA和C3G-CMC-CaCl2,其平均粒径分别为288、376、310和180 nm，zeta电位分别为30、32.6、36.9和-19 mV，具有良好的稳定性，并对他们进行TEM和FITR的表征，模拟了纳米粒子在pH7.4、pH6.8、pH5.0和pH5.0+溶酶体的PBS缓冲溶液中的花色苷释放，表明花色苷纳米粒子的体外释放对pH具有敏感特征，即在较低的pH条件下，可以较迅速的将花色苷从中释放出来，且累积释放量明显高于生理pH的环境。而在较高pH时，则释放行为变得缓慢。
　　(3)通过这四种负载C3G纳米粒子对红细胞的溶血和形态，血浆的APTT值、PT值和全血的TEG影响，来进行血液相容性评价。低浓度的纳米粒子对红细胞没有明显的溶血作用，对血浆的APTT和PT值无显著影响，TEG分析表明纳米粒子有一定的促凝血作用，但影响较小，这与纳米粒子的带正电有关，结果证明了四种负载花色苷纳米粒子与血液都具有良好的相容性。细胞毒性实验表明，不同浓度的纳米粒子对LO2的成活率没有明显的影响，所合成的纳米粒子具有良好的生物相容性。

目录

缩略词表

摘要

第一章 前言

1．1 海棠果的性状及其分布

1．2 高酸海棠果成分分析

1．3 花色苷概述

1．3．1 花色苷作为食品添加剂

1．3．2 花色苷的化学结构

1．4 花色苷的生物合成途径

1．5 花色苷的提取方法

1．5．1 溶剂浸提法

1．5．2 酶解法

1．5．3 超声波辅助提取

1．5．4 微波辅助提取法

1．5．5 超临界流体萃取法

1．6 花色苷的纯化和鉴定方法

1．6．1 花色苷的纯化方法

1．6．2 花色苷的鉴定方法

1．7 花色苷的功能活性

1．7．1 清除自由基

1．7．2 预防心血管疾病

1．7．3 抗炎作用

1．7．4 抗突变及抗肿瘤作用

1．8 花色苷的稳定性

1．8．1 花色苷结构的影响

1．8．2 pH值的影响

1．8．3 温度的影响

1．8．4 光的影响

1．8．5 金属离子的影响

1．9 提高花色苷稳定的方法

1．10 壳聚糖的简介

1．11 血液相容性评价

1．12 研究目的与意义

1．13 研究内容

1．14 课题创新点

第二章 高酸海棠果中花色苷的分离和鉴定

2．1 实验试剂

2．2 实验仪器

2．3 实验方法

2．3．1 花色苷的提取分离和纯化

2．3．2 花色苷结构分析方法

2．3．3 总花色苷含量的测定方法

2．3．4 数据分析

2．4 结果与讨论

2．4．1 高酸海棠果花色苷总含量分析

2．4．2 高酸海棠果花色苷的纯化和鉴定

2．5 本章小结

第三章 负载C3G纳米粒子的制备和缓释研究

3．1 实验试剂

3．2 实验仪器

3．2 实验方法

3．2．1 负载C3G的纳米粒子的制备

3．2．2 空白纳米粒子的制备

3．2．3 纳米粒子粒径分布和zeta电位测量

3．2．4 纳米粒的形貌分析

3．2．5 纳米粒子的FITR表征

3．2．6 纳米粒子载药量和包封率测定

3．2．7 纳米粒子的稳定性

3．2．8 负载C3G纳米粒子体外缓释

3．3 结果与讨论

3．3．1 负载C3G纳米粒子的粒径分布和及zeta电位

3．3．2 包封率和包埋率分析

3．3．3 红外表征分析

3．3．4 负载C3G纳米粒子体外缓释分析

3．3．5 纳米粒子稳定性分析

3．4 本章小结

第四章 负载花色苷纳米粒子的安全性评价

4．1 实验材料与试剂

4．1．1 实验材料

4．1．2 实验试剂

4．2 实验仪器

4．3 实验方法

4．3．1 负载C3G纳米粒子的制备

4．3．2 纳米粒子的细胞毒性实验

4．3．3 对红细胞溶血的影响

4．3．4 对红细胞形态的影响

4．3．5 对血液APTT和PT值的影响

4．3．6 对凝血功能的影响

4．3．7 数据分析

4．4 结果与讨论

4．4．1 纳米粒子溶血率分析

4．4．2 纳米粒子对红细胞形态的影响

4．4．3 纳米粒子对APTT和PT值的影响

4．4．4 纳米粒子对血栓弹力图的影响

4．4．5 细胞毒性实验

4．5 本章小结

结论

展望

参考文献

攻读学位期间的研究成果

声明

致谢