藏药绿萝花化学成分及降糖生物活性的研究

摘要

藏药材绿萝花为瑞香科结香属植物滇结香(Edgeworthia gardneri)的干燥花蕾，是西藏地区特有的民族特色习用药材，泡水饮用可以治疗糖尿病、高血脂等慢性疾病。藏药绿萝花在降血糖方面有较好的效果，但绿萝花成分复杂，对于绿萝花的化学成分报道较少，即对绿萝花的化学成分有极少的系统性的研究。降糖活性也仅仅是对绿萝花粗提物的研究，尚未见绿萝花单体化合物降血糖活性的研究与报道，即其有效成分与作用机理并不明确，因此限制了绿萝花在降糖药物方面的开发和应用。
　　本文通过综合运用各种分离技术及化学方法进行分离，并采用现代波谱技术（NMR、MS、IR、UV）和X-ray单晶衍射等方法进行结构鉴定，对绿萝花的甲醇提取物进行系统的化学成分研究。从绿萝花中分离鉴定得到20个化合物，分别为4个香豆素(1、2、10、17)，7个黄酮类(7、8、12-16)，5个苯丙素类(5、9、18-20)，1个木脂素类化合物(11)以及3个苯的衍生物(3、4、6)。其中化合物1和2是新化合物。化合物12在绿萝花提取物中的含量很高，经HPLC法含量测定，化合物12在绿萝花中的含量为13.16％。
　　通过对化合物1-20进行体外的α-葡萄糖苷酶抑制活性实验，结果表明，绿萝花提取物具有中等的抑制活性，IC50值为267μg/mL。化合物8的活性最好，IC50值为5.1μg/mL。化合物7表现出较强的抑制活性，IC50值为56.2μg/mL，化合物12显示中等活性，IC50值为202μg/mL。为了进一步探索化合物12对α-葡萄糖苷酶的抑制机制，本文对其进行了抑制动力学研究。结果表明化合物12是一种竞争性抑制剂。根据Michaelis-Menten动力学，抑制常数（Ki）的值是0.473 mM。此外，化合物1-20的体外α-淀粉酶抑制活性实验结果表明，绿萝花提取物具有中等的抑制活性，IC50值为220μg/mL，化合物8、12表现出较强的抑制效果，IC50值分别为7.3μg/mL和12.02μg/mL，其它化合物显示微弱的抑制活性。通过对绿萝花的抗氧化活性研究表明，从乙酸乙酯相分离得到的黄酮类化合物都呈现出显著的抗氧化能力，表明绿萝花的抗氧化活性主要与黄酮类化合物相关。
　　为了进一步证实化合物12对α-葡萄糖苷酶的抑制活性，本文通过口服蔗糖耐受实验研究化合物12在小鼠体内的降血糖活性，结果表明，化合物12能够显著降低正常和糖尿病小鼠的餐后血糖。与格列本脲不同的是，化合物12能够降低糖尿病小鼠的空腹血糖，但对正常小鼠不起作用，这说明化合物12不能直接作用于胰岛素的释放，而可能涉及保护胰腺β细胞的存活及功能。

目录

摘要

第一章 绪论

1．1 糖尿病简介

1．1．1 糖尿病类型

1．1．2 糖尿病危害与治疗

1．2 藏药绿萝花的研究概述

1．2．1 绿萝花的化学成分研究进展

1．2．2 绿萝花的药理活性研究进展

1．2．3 绿萝花的应用

1．3 本论文研究目的与研究内容及意义

1．3．1 研究目的

1．3．2 研究内容及意义

第二章 藏药绿萝花的化学成分研究

2．1 引言

2．2 材料与试剂

2．3 仪器与设备

2．4 植物来源

2．5 实验方法

2．5．1 提取与分离过程

2．5．2 化合物12的含量测定

2．6 结果与讨论

2．6．1 新化合物的结构解析

2．6．2 已知化合物的结构解析

2．6．3 各化合物的物理常数与波谱数据

2．7 本章小结

第三章 绿萝花的体外生物活性研究

3．1 引言

3．2 仪器与设备

3．3 材料与试剂

3．4 实验部分

3．4．1 α-葡萄糖糖苷酶的抑制活性研究

3．4．2 化合物12对α-葡萄糖苷酶的抑制动力学研究

3．4．3 α-淀粉酶的抑制活性研究

3．4．4 抗氧化活性研究

3．5 结果与讨论

3．5．1 化合物1-20对α-葡萄糖苷酶的抑制活性

3．5．2 化合物1-20对α-淀粉酶的抑制活性

3．5．3 化合物12的α-葡萄糖苷酶动力学

3．5．4 绿萝花的抗氧化活性

3．6 本章小结

第四章 绿萝花体内降血糖活性研究

4．1 前言

4．2 仪器与试剂

4．3 实验动物来源

4．4 实验部分

4．4．1 糖尿病小鼠模型的建立

4．4．2 化合物12的体内降血糖活性研究

4．5 结果与讨论

4．5．1 化合物12对正常和糖尿病小鼠餐后血糖的影响～

4．5．2 化合物12对正常和糖尿病小鼠空腹血糖的影响

4．6 本章小结

结论与展望

参考文献

攻读硕士学位期间发表的论文

声明

致谢

新化合物的谱图