抗WSSV卵黄抗体的制备及其对对虾白斑病防治效果的研究

摘要

白斑综合症(White Spot Syndrome,WSS)是近十余年来对虾养殖中危害最大和造成经济损失最严重的疾病，至今缺乏有效的治疗措施。本文首次系统利用卵黄抗体人工被动免疫法对该病的预防与应急治疗进行了探索。 为了获得足量的WSSV抗原，本文以感染WSSV的对虾前肠和鳃等组织为材料，分别利用差速离心法和蔗糖密度梯度离心法进行了WSSV的分离纯化，结果表明：利用差速离心法虽然能够使所分离的WSSV的完好率达70％左右，但其中杂质较多，病毒粒子的收获量较少；利用蔗糖密度梯度离心法提取WSSV，虽然其完好率稍低于差速离心法，但也可以达到60％以上，并且，所得到的WSSV的量要大大高于差速离心法，适合于WSSV的大量分离。 为了获得制备抗WSSV卵黄抗体的合适方法，本文利用提纯的WSSV分别制备了福氏佐剂WSSV活疫苗、水溶性蜂胶佐剂WSSV活疫苗、白油佐剂WSSV活疫苗、氢氧化铝佐剂WSSV活疫苗、福氏佐剂WSSV灭活疫苗以及不用佐剂的WSSV活疫苗，分别采用翅膀基部肌肉多点注射接种和颈部皮下注射接种2种方式对海兰褐壳蛋鸡(Hy-Line Brown)进行免疫接种，并采用微量血凝抑制实验对血清和卵黄中的抗体进行检测。实验结果表明： (1)通过制备合适的WSSV疫苗接种母鸡，可以获得较高抗体效价的抗WSSV卵黄抗体； (2)就本研究使用的各种疫苗的免疫效果而言，使用活WSSV比使用灭活WSSV的效果好，使用佐剂比不使用佐剂的效果好，本实验所使用的4种佐剂免疫效果由强到弱的顺序依次为：福氏佐剂和水溶性蜂胶佐剂、白油佐剂、氢氧化铝佐剂； (3)就本研究使用的两种接种方法的免疫效果而言，颈部皮下注射接种要明显优于翅膀基部肌肉多点注射接种； (4)在第一轮免疫所产生的抗WSSV抗体水平下降后，若以相同的抗原和相同的方法再进行了第二轮免疫，可以使抗WSSV抗体效价再次升高，并且，第二轮免疫出现的抗体效价最高值比第一轮免疫产生的抗体效价最高值还要高，使持续获得大量高效价抗WSSV卵黄抗体成为可能； (5)卵黄抗体可以在低温下以卵黄液的形式或卵黄抗体提取液的形式保存，并且，温度越低的保存效果越好；以卵黄抗体提取液的形式保存比以卵黄液的形式保存效果好； (6)在以WSSV接种母鸡后，除在其所产鸡蛋卵黄中可以获得高效价抗WSSV抗体外，在其所产鸡蛋的蛋白中也可获得较高效价的抗WSSV抗体，在同一个鸡蛋中，后者的抗体效价仅比前者的抗体效价低约1个滴度。 (7)在本文所研究的各种方法中，以皮下注射福氏佐剂WSSV活疫苗获得的抗WSSV卵黄抗体效价最高，第一轮接种获得的最高抗WSSV卵黄抗体效价为1:640，第二轮接种获得的最高抗WSSV卵黄抗体效价为 1:896。 以所制备的卵黄抗体对对虾白斑病的预防与治疗研究结果表明：以不同WSSV 疫苗接种母鸡制备的卵黄液虽然其抗WSSV卵黄抗体效价相差较大，但在2％的投喂浓度下，对预防和治疗对虾白斑病都有十分良好的效果。若以抗WSSV卵黄抗体效价为 1:448的卵黄液拌料投喂感染WSSV的实验对虾，其拌料浓度为0.1％和0.5％时，对对虾白斑病的暴发虽有一定程度的延缓作用，但并不能有效控制对虾白斑病的暴发；当其拌料浓度达到1％以上时，则对预防和治疗对虾白斑病均有显著效果，可以显著提高感染WSSV的对虾的成活率。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章文献综述

一对虾白斑病及其研究概况

二卵黄抗体及其应用研究进展

第二章实验研究

第一节WSSV的分离纯化

1材料与仪器

2实验方法

3结果

4讨论

第二节抗WSSV卵黄抗体的制备及其效价检测

1材料与仪器

2实验方法

3结果

4讨论与结论

第三节抗WSSV卵黄抗体防治对虾白斑病的研究

1材料与方法

2结果

3讨论

致谢

参考文献