海南万宁小海近岸表层海水的细菌调查及海南近岸副溶血弧菌的分子分型

摘要

本文还从海南岛周边部分县市的近岸海域及水产动物养殖场水体中分离并运用PCR方法结合生化鉴定获得126株副溶血弧菌，应用RAPD技术对所分离菌株进行分子分型，根据RAPD技术对126株副溶血弧菌扩增结果构建了聚类图和遗传距离矩阵。 细菌数量调查结果显示：万宁小海调查各站位的总菌数为2.1×105～2.7x108cfu/mL：活菌数为1.1×105～1.6×107cfu/mL；异养菌数为1.3×103～8.5x104cfu/mL：弧菌数为4.0x10～5.7x103cfu/mL。不同季节万宁小海活菌和总菌数量分布的研究结果表明，除个别站位外，海水中活菌和总菌数变化的趋势是夏季较高，冬季较低；但海水中异养菌和弧菌的数量分布则为气候较为温和的春、秋季较高，而温度较高和较低的夏、冬季数量则较低。相关性分析显示，弧菌数量与盐度及酸碱度呈显著正相关；总菌和活菌数量与温度呈显著正相关；总菌和活菌之间存在显著的正相关性；弧菌和异养菌之间存在显著的正相关性。根据异养菌数量对小海水体质量的评估结果为中度到重度污染。 弧菌种类调查结果显示：从万宁小海表层水体分离的弧菌主要有溶藻弧菌(V。alginolyticus)、副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)和霍乱弧菌(V.cholerae)等7种，其中溶藻弧菌、副溶血弧菌和霍乱弧菌的检出时间主要集中在夏季和秋季；河流弧菌(V.fluvialis)的检出时间主要集中在春季和夏季；创伤弧菌(V.vulnificus)在全年都有检出且检出率没有显著变化；哈维弧菌(V.harveyi)和拟态弧菌(V.mimicus)的检出时间主要集中在冬季。相关性分析结果表明，弧菌分布与温度、盐度、溶解氧和酸碱度存在的相关性因不同弧菌种类、不同站位和不同季节而异。聚类分析结果表明，万宁小海在夏季和秋季的弧菌组成相似性最高;距离较近的站位的弧菌组成的相似性通常也较高。 应用RAPD技术对所分离的126株副溶血弧菌菌株进行分子分型以及对这126株副溶血弧菌扩增结果构建的聚类图和遗传距离矩阵结果表明，所分离的126株副溶血弧菌间最小遗传距离为0.004，最大遗传距离为0.742；副溶血弧菌菌株间的遗传分化和RAPD遗传聚类群的分布受地理因素的影响显著，相同地区或临近地区菌株的遗传分化小，而不同地区的分化大。相同地理来源的菌株具有更近的亲缘关系而不同地理来源的菌株间的亲缘关系较远。根据RAPD分型结果挑选了15株副溶血弧菌对罗非鱼(tilapia)进行感染试验并测定其半致死浓度(LD50值)，结果表明，编号为VP-02和VP-05的菌株为对罗非鱼具有致病性，它们对罗非鱼的LD50值分别为1.19×104cfu/g和2.27x104cfu/g。药物敏感性试验表明，VP-02只对链霉素和妥布霉素2种药物敏感，而VP-05对左氟沙星、派拉西林、奥复星、氟哌酸、吡哌酸、先锋必素、链霉素7种药物敏感。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章文献综述

1海洋细菌的调查研究

1.1国内外海洋细菌的调查概况

1.2几类海水细菌数量的调查方法

1.3影响海水细菌分布的因素

1.4细菌在海洋环境监测中的指示作用

1.5异养菌总数在水质评估中的应用

2我国海洋弧菌（Vibrio）的调查研究

2.1我国海洋弧菌的调查概况

2.2弧菌的分类

2.3弧菌属细菌与海水养殖业的关系

3弧菌的分类鉴定

3.1弧菌分类鉴定的传统方法

3.2弧菌分类鉴定的分子生物学方法

第二章实验研究

前言

第一节万宁小海近岸水域表层海水的总菌、活菌、异养菌和弧菌的数量动态研究

1材料和方法：

2结果与分析

3、讨论

第二节海南省万宁小海近岸水域表层海水的弧菌种类分布及变动规律的研究

1实验材料

2实验方法

3结果与分析

4、讨论

第三节副溶血弧菌的分子分型及毒力菌株的药敏分析

1实验材料

2实验方法

3结果

4讨论

附图(RAPD电泳图)：

致谢

参考文献