BMP-2对体外扩增中的人胎盘CD133细胞生物学特性的影响

摘要

目的：通过体外扩增以增加造血干/祖细胞(HSPCs)的数量可能是解决HSPCs移植数量不足的有效途径。然而，HSPCs体外扩增的同时势必发生不同程度的分化，HSPCs的比例减少，使其种植、归巢及增殖分化能力下降，移植后难以维持长期造血。因此，抑制HSPCs的过度分化，是其体外扩增中亟待解决的问题。本研究采用体外扩增体系观察骨形态发生蛋白-2(BMP-2)对人胎盘(HP)CD133+HSPCs生物学特性的影响，旨在探索HSPCs体外扩增的新途径。 方法：①采用机械法制备HP单个细胞悬液，用Histopaque从中分离出单个核细胞(MNCs)，经MiniMACS免疫磁珠激活分选系统分离纯化CD133+细胞。②在含有FL、SCF、TPO和IL-3的CD133+细胞无血清体外扩增体系中加入不同浓度的BMP-2，体外培养两周。③采用流式细胞术(FCM)和造血祖细胞(HPC)集落形成实验，动态观察体外扩增过程中BMP-2对CD133+HSPCs增殖、细胞表型、粘附分子、集落形成能力等生物学特性的影响。 结果：①BMP-2组和对照组的有核细胞(NCs)和CD133+细胞均有不同程度的扩增。培养至14天时，BMP-2低剂量组(5ng/ml)和高剂量组(25ng/ml)分别扩增了(27.67±5.39)倍和(24.25±2.05)倍，与对照组(34.52±4.38倍)比较，高剂量组NCs的扩增明显受到抑制(p＜0.05)。BMP-2低剂量组和高剂量组CD133+细胞培养至第7天，分别扩增了(7.09±2.37)倍和(3.50±0.70)倍，两者与对照组(4.88±1.84倍)相比，无显著性差异(p＞0.05)。②培养至14天时，BMP-2低剂量组和高剂量组CD133+细胞CD49d表达的百分率分别为(53.80±3.00)％和(58.52±3.91)％，均高于对照组(44.44±3.94％)(p＜0.05；p＜0.01)。BMP-2低剂量组中CD133+细胞CD11a、CD54和CD62L的表达比例分别为(44.62±3.89)％、(56.68±1.03)％和(14.76±8.37)％，均低于其相应对照组(57.29±1.96％、67.80±7.04％和37.48±4.81％)(p＜0.05)。③BMP-2低剂量组PT-CD133+-HSPC所形成的CFU-GM、CFU-E和CFU-MIX的数量分别为161.00±16.82/5×103、62.67±21.50/5×103和21.00±2.65/5×103，高剂量组形成的上述集落数分别为160.33±21.82/5×103、55.33±19.30/5×103和19.33±1.53/5×103，与对照组比较无显著性差异(p＞0.05)。 结论：①适当剂量的BMP-2能够部分抑制CD133+细胞的分化，促进HSPCs的增殖，上调某些粘附分子的表达，有助于提高扩增细胞的植入和归巢能力。②CD133+HSPCs对造血负调因子有较好的反应性，是研究HSPCs增殖与分化调控的生物模式。

目录

摘要

前 言

一、材料和方法

二、结 果

三、讨 论

四、结 论

参考文献

致 谢

附录：英文缩略词表

[综述]BMP与造血调控