Omi/HtrA2荧光蛋白表达载体的构建及其在卵巢浆液性囊腺癌HO8910PM细胞株中的作用

摘要

背景与目的：细胞凋亡调节紊乱与肿瘤的发生密切相关。Omi/HtrA2是新近发现的一种促凋亡因子，可通过抑制凋亡抑制蛋白(1APs)、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspascs)途径和丝氨酸蛋白酶途径双通路促进细胞凋亡。目前有关Omi/HtrA2在卵巢癌中的作用的研究尚未见报道。本研究旨在探讨Omi/HtrA2在卵巢浆液性囊腺癌中的表达，及其对人卵巢浆液性囊腺癌HO8910PM细胞凋亡的影响。 材料与方法：研究对象为人正常卵巢组织和H08910PM细胞株(高转移性人卵巢浆液性囊腺癌)。(1)采用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Omi/HtrA2mRNA在卵巢浆液性囊腺癌H08910PM细胞株和正常卵巢组织中的表达。(2)采用基因克隆技术构建pDsRed2-Omi/HtrA2融合基因；以脂质体法转染pDsRcd2-Omi/HtrA2融合基因至HO8910PM细胞株中，荧光显微镜下观察其蛋白在HO8910PM中的表达和定位；并采用流式细胞术及TUNEL方法检测Omi/HtrA2对HO8910PM细胞凋亡的作用。 结果：(1)RT-PCI湿示在人正常卵巢组织中Omi/HtrA2 mRNA有微弱表达，而在人高转移性卵巢浆液性囊腺癌HO8910PM细胞中却未检测到omi/HtrA2 mRNA的表达。(2)采用基因克隆技术构建的pDsRed2-Omi/HtrA2融合基因，通过PCR技术和酶切反应证实其插入片断与预知的相符。其融合蛋白在HO8910PM细胞中的定位主要表现为弥散性分布于细胞浆或细胞核，且蛋白表达量在一定范围内随转染浓度的增加而增加。在转染了pDsRed2-Omi/HtrA2融合基因的HO8910PM细胞中，经AnnexinV-FITC及PI双染、FCM检测结果显示其细胞凋亡率为21.64％，高于未转染组(3.42％)及转空质粒pDsRed2-N1组(4.86％)，(P<0.01)；而在pDsRcd2-Omi/HtrA2融合基因转染HO8910PM细胞后，通过加入化疗药物紫杉醇，可检测到细胞凋亡率增加(43.58％)，高于未转染质粒的单纯加药组(18.36％)，(p<0.01)。转染了不同浓度pDsRed2-Omi/HtrA2融合基因的HO8910PM细胞株中，经TUNEL方法检测结果显示，高浓度转染组的阳性细胞数高于低浓度转染组，(P<0.01)。 结论：(1)Omi/HtrA2 mRNA在人正常卵巢组织中有表达，在人高转移性卵巢浆液性囊腺癌HO8910PM细胞株中无表达，提示Omi/HtrA2在高转移卵巢浆液性囊腺癌中可能缺失。(2)成功地构建了pDsRed2-Omi/HtrA2融合基因。其融合蛋白在HO8910PM细胞株中的定位主要在细胞浆或细胞核并呈弥散性分布，且pDsRed2-Omi/HtrA2融合蛋白的表达在一定范围内随转染浓度的增加而增加。pDsRed2-Omi/HtrA2融合蛋白能够促进HO8910PM细胞株的凋亡，且随omi/HtrA2蛋白表达量的增加其促凋亡作用亦随之增强。Omi/HtrA2蛋白能够增强卵巢浆液性囊腺癌细胞株HO8910PM对化疗药物紫杉醇促凋亡作用的敏感性。

目录

论文说明：主要英文缩略词表

引言

材料与方法

实验结果

讨论

结论

参考文献

促凋亡因子Omi/HtrA2的研究进展

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