硒、钼、硼对氟中毒大鼠氟代谢及其成釉细胞生物学特性影响的实验研究

摘要

目的：对饮用氟化钠水大鼠饲以不同浓度亚硒酸钠，钼酸铵，四硼酸钠饲料，观察大鼠的各项指标变化，以探讨硒、钼、硼与氟的相互作用，寻找对氟中毒有较好拮抗作用的微量元素。
　　 方法：本实验包括两个部分
　　 实验一：硒、钼、硼对氟中毒大鼠氟代谢的影响
　　 1、动物的选择、分组及饲养：64只wistar大鼠，随机分成8组，每组8只，雌雄各半，分笼人工喂养（含氟水和含硒钼硼的饲料由人工定量喂养，不足的由蒸馏水和常规饲料补足）。对照组正常饮水饮食，实验组（硒、钼、硼、氟组）饮用含氟（F￣）45mg/L的蒸馏水，另外，硒、钼、硼组分别在饲料中加入硒0.3mg/kg、硒1.5mg/kg、钼55mg/kg、钼82.2mg/kg、硼45mg/kg、硼55mg/kg，喂养16周。
　　 2、观察指标及方法
　　 （1）实验起始时和每周末记录体重，观察大鼠一般情况。
　　 （2）每隔四周收集大鼠24h尿样，用氟离子电极选择法和羟脯氨酸试剂盒分别检测尿氟和羟脯氨酸的含量。
　　 （3）每隔四周观察大鼠氟牙症患病情况，根据氟牙症分级标准对各组大鼠氟牙症进行记分。
　　 （4）16周末断头处死大鼠，取包括下切牙的部分下颌骨固定，脱钙，切片。
　　 实验二硒、钼、硼对氟中毒大鼠成釉细胞形态学及PCNA、C-myc表达变化的影响
　　 1、利用光镜和透射电镜观察成釉细胞的形态变化及细胞器的改变。
　　 2、利用原位末端细胞凋亡检测（TdT-medjated-dUTP nicked end labeling，TUNEL）技术观察成釉细胞凋亡的发生，并且通过免疫组织化学检测技术，观察大鼠切牙釉质发生过程中成釉细胞中调控基因增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclearantigen，PCNA）、原癌基因c-myc的表达。采用图像分析软件对免疫组化染色结果进行半定量分析。
　　 结果：
　　 1、随实验时间延长，各组体重逐渐增加，硒组高于钼组和硼组，差异有统计学意义（P<0.05）。尿氟浓度升高。16周末，氟组尿氟浓度降低，与硒组、钼组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。
　　 2、氟牙症情况：各组在四周末均出现氟牙症，随染氟时间延长出现中度氟牙症，未出现重度氟牙症。实验结束时，硒组有三例无氟牙症，与硼组、钼组、氟组比较有意义（p<0.05）。钼组及硼组氟牙症症状轻于氟组。
　　 3、尿羟脯氨酸情况：16周时，硒组含量低于氟组、钼组、硼组，比较有差异（p<0.05）。
　　 4、HE染色结果：对照组大鼠成釉细胞成高柱状，排列均匀一致。氟组成秞细胞排列极不规则，大量细胞扭曲，釉质变薄。硒、钼、硼组介于两者之间。
　　 5、TEM结果：实验组成秞细胞出现了细胞器的减少，细胞膜、线粒体、粗面内质网及核膜受到不同程度的损伤。
　　 6、细胞凋亡、PCNA、C-myc表达的影响：实验组细胞凋亡抑制，C-myc的表达减弱，PCNA表达增强，以硒组明显。
　　 结论：
　　 1、在实验设计剂量下，硒、钼、硼可能具有拮抗氟中毒的作用，从大鼠的体重增长、氟斑牙形成情况表明硒的作用可能优于钼、硼。
　　 2、本实验后期出现尿羟脯氨酸增加，与以往研究结果一致。
　　 3.光、电镜结果显示氟中毒可以导致成秞细胞损伤。硒、钼、硼具有拮抗氟引起的细胞损伤作用。
　　 4、硒、钼、硼减轻氟毒性可能通过拮抗氟引起的细胞凋亡、c-myc表达增强、PCNA表达减弱等作用有关

目录

文摘

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主要英汉缩略词表

前言

实验一： 硒、钼、硼对氟中毒大鼠氟代谢的影响

实验二：硒、钼、硼对氟中毒大鼠成釉细胞形态学及PCNA、C—myc表达变化的影响

讨论

小结

参考文献

贵州省氟斑牙流行现状分析(综述)

参考文献

致谢