空肠弯曲菌pcDNA3.1(-)-peb1A诱导的细胞免疫应答初步探讨

摘要

目的：探讨CJ pcDNA3.1(-)-peblA免疫昆明种小鼠后的细胞免疫应答机制及对机体的保护性。
　　 方法：(1)重组质粒pcDNA3.1(-)-peblA的鉴定和大量制备。(2)重组质粒pcDNA3.1(-)-peblA免疫昆明种小鼠后，采集脾细胞和血清：①采用细胞ELISA法检测小鼠脾T淋巴细胞膜表面分子CD3、CD4、CD8、CD25和CD28。②ELISA检测小鼠血清中IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ和TGF-β的水平。③空肠弯曲菌攻击实验：实验组分别于末次免疫后第26天用新鲜培养的CJ菌液灌胃免疫后小鼠，观察灌胃后一周小鼠的发病及死亡情况，并做肠道分泌液细菌培养。
　　 结果：(1)重组质粒pcDNA3.1(-)-peblA PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，为单一条带，大小为812bp；应用Qiagen plasmid Giga Kit大量抽提的纯度为1.929，浓度为2064μg/ml。(2)T淋巴细胞膜表面分子水平的检测结果显示：①CD3中佐剂DNA组高于裸DNA组在第10天有显著性差异(P<0.05)：②CD8中佐剂DNA组高于裸DNA组在第10、20天均有显著性差异(P<0.05)，而裸DNA组高于两对照组仅在第20天有显著性差异(P<0.05)；③CD25中裸DNA组高于NS组在仅第10天有显著性差异(P<0.05)，佐剂DNA组高于裸DNA组仅在第20天有显著性差异(P<0.05)；④CD4.及CD28中佐剂DNA组高于裸DNA组在第10、20天均有显著性差异(P<0.05)；⑤在第10、20天各T淋巴细胞膜表面分子中佐剂DNA组高于两对照组，有显著性差异(P<0.05)。(3)Th1类细胞因子IL-2、IFN-γ，在第10、20、30天，裸DNA组、佐剂DNA组、空载体组及NS组两两相比均无显著性差异(P>0.05)；Th2类细胞因子IL-4、IL-10、TGF-β：①裸DNA组高于两对照组，在IL-4、TGF-β的检测中有显著性差异(P<0.05)，在IL-10的检测中裸DNA组高于NS组有显著性差异(P<0.05)，其裸DNA组高于空载体组仅在第20天有显著性差异(P<0.05)；②佐剂DNA组高于裸DNA组，在IL-4的检测中有显著性差异(P<0.05)，在IL-10的检测中仅在第10、20天有显著性差异(P<0.05)，在TGF-β的检测中仅第20、30天有显著性差异(P<0.05)；③佐剂DNA组高于两对照组，有显著性差异(P<0.05)。(4)细菌攻击实验：由疾病指数可知，裸DNA组低于两对照组，有显著性差异(P<0.05)；佐剂DNA组低于裸DNA组，有显著性差异(P<0.05)：由肠道分泌液细菌培养结果看出，裸DNA组的细菌指数低于两对照组：佐剂DNA.组低于裸DNA组。
　　 结论：(1)重组质粒pcDNA3.1(-)-peblA构建成功。(2)CJ pcDNA3.1(-)-peblA疫苗能够诱导有效的细胞免疫应答。

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综述 基因免疫的免疫特性及其免疫机制的研究

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