甲型副伤寒STF口服制剂的制备和检定

摘要

目的：初步研制一种用于紧急预防和辅助治疗甲型副伤寒的新型生物制剂，并探索其制备工艺。
　　 方法：(1)体内免疫法制备甲型副伤寒特异性转移因子(PA-STF):制备甲型副伤寒沙门菌(SPA)免疫原，采取皮下多点注射免疫山羊，免疫成功后分别取脾脏和淋巴结制备PA-STF。(2)体外免疫法制备PA-STF:采用SPA体外免疫脾细胞技术，探索PHA刺激的合适剂量、免疫原最佳浓度及最佳作用时间、免疫羊脾细胞最适培养时间，按优化条件培养羊脾细胞，制备PA-STF。(3) PA-STF的理化性质检定：采用紫外分光光度计进行多波长扫描，以苔黑酚法和改良Lowry法分别检测PA-STF的核糖及多肽含量，并进行无菌试验、热原质试验和安全试验等。(4) PA-STF的免疫学活性检定：取昆明小鼠，随机分成实验1组、实验2组、对照1组、对照2组和NS组，分别以体内法制备的PA-STF、体外法制备的PA-STF、体内法制备的非特异性转移因子(nTF)、体外法制备的nTF、生理盐水灌胃，采用淋巴细胞增殖试验、白细胞粘附抑制试验(LAIT)、吞噬细胞吞噬功能试验、吞噬细胞杀菌功能试验和免疫保护性试验等检定PA-STF的免疫学活性。免疫保护性试验中，SPA攻击后第4天仍然存活的小鼠，取5只观察攻击后2周时的一般情况，剩余小鼠在攻击后第7天处死，剪取3cm的回肠用4%甲醛固定后，HE染色，镜检，观察肠粘膜的病理学改变。
　　 结果：(1)以淋巴结制备的PA-STF的多肽浓度为1.83±0.17mg/ml，核糖浓度为0.572±0.024mg/ml，以脾脏制备的PA-STF的多肽浓度为1.59±0.22 mg/ml，核糖浓度为0.493±0.015mg/ml，两者相比，多肽之间及核糖之间浓度没有显著差异(P>0.05)。(2)100μg/ml的PHA与脾细胞培养6h后，加入0.2ng/ml的SPA免疫原，继续培养至96h条件下制备的PA-STF的多肽和核糖的含量，明显高于其他剂量、时间等条件下制备的PA-STF(P<0.05)。(3)两种方法制备的PA-STF的氨基酸、多肽、核糖的含量无显著性差异(P>0.05)，无菌试验均为阴性，热原质试验和安全试验均合格。(4)两种方法制备的PA-STF在多肽浓度为0.60mg/ml时，对淋巴细胞的刺激指数(SI)明显高于其它浓度时的SI(P<0.05)；两实验组的LAIR均高于两对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；两实验组之间比较，LAIR无显著性差异(P>0.05)；吞噬细胞的吞噬功能和杀菌功能试验中，实验组与对照组之间以及两实验组之间比较，吞噬率和杀菌率均无显著性差异(P>0.05)，各组吞噬率与杀菌率的相关系数均大于0.8；免疫保护性试验中，两实验组分别与两对照组比较，实验组小鼠存活率均明显高于对照组(P<0.05)，两实验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。实验组存活小鼠2周时一般情况明显好于其它组，且病理学结果显示小鼠回肠粘膜的炎性程度较其它组轻。
　　 结论：(1)体内免疫法成功制备PA-STF，脾脏和淋巴结均可作为制备原料；体外免疫法成功制备PA-STF，以100μg/ml的PHA与脾细胞共同培养6h，然后加入浓度为0.2ng/ml的PA免疫原，第96h终止培养为最佳制备条件。(2)两种方法制备的PA-STF口服制剂的理化性质均符合《中国药典》(2005版)的要求标准。(3)两种方法制备的PA-STF口服制剂均可以增强小鼠的非特异性免疫应答，能够转移针对SPA的特异性免疫效应。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英汉缩略词对照表

声明

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述 特异性转移因子的研究现状及临床应用进展

致谢

附图