秃疮花中异喹啉类生物碱的分离与分析方法研究

摘要

秃疮花(Dicranostigma leptopodum(Maxim.)Fedde，DLF)属罂粟科秃疮花属植物，我国主要分布于甘肃、陕西等地，带根全草民间供药用，性凉，苦涩味，有毒;具有清热解毒、消肿止痛及杀虫等功效;秃疮花主要含有多种异喹啉类生物碱如异紫堇碱(isocorydine)、原阿片碱(protopine)、紫堇碱(corydine)、异紫堇啡碱(d-Isocorydine)、木兰碱(magnflorine)、血根碱(sanguinarine)、白屈菜红碱(chelerythrine)、别隐品碱(alIocryptopine)和海罂粟碱(glaueine)。根含原阿片碱、血根碱(sanguinarine)，别隐品碱、隐品碱(cryptopine)等。鉴于秃疮花传统的药用习惯和原地方药材标准的质量控制缺陷以及生物碱类化合物较好的药理活性，建立和控制秃疮花中生物碱、秃疮花源植物提取物及单体化合物的质量控制标准和方法具有重要的科学意义和应用价值。具体研究内容如下:
　　 1、通过柱色谱分离方法，从秃疮花中分离得到1个新的季胺型小檗碱类生物碱类化合物5-羟基黄连碱。
　　 2、建立了秃疮花中提取分离单体化合物异紫堇碱（isocorydine）的含量测定和有关物质检查方法，为国家药品标准盐酸异可利定的质量控制方法提供科学依据。
　　 3、本研究采用甲醇回流提取建立了秃疮花中生物碱的样品制备方法，采用梯度洗脱RP-HPLC-DAD建立了秃疮花中小檗红碱、原阿片碱、别隐品碱、紫堇碱、异紫堇碱和异紫堇二酮6种异喹啉生物碱的含量测定方法并进行方法学验证，建立的色谱条件如下:色谱柱:SinoChrom ODS-BP C18柱(4.6 mm×250 mm，5μm);流动相:乙腈(A)-三乙胺调至pH6.02的0.2％磷酸水溶液(B);梯度条件:0-5min25％ A;5-20 min25％-50％ A;20-30 min50％ A;30-31.1 min50％-25％ A;31.1-35 min25％ A;流速:1.0 mL/min进样量:20μL;柱温:30℃;检测波长:280 nm。
　　 4、采集甘肃境内主要包括庆阳、平凉、天水和陇南市的不同产地和不同采收时间的秃疮花，进行生物碱含量测定，探索和考察秃疮花生物碱含量差异和变化规律:不同产地和不同采收时间的秃疮花中其主要生物碱类化学成分为异紫堇碱（isocorydine），其含量显著高于其他生物碱，异紫堇二酮的含量最低，陇南产秃疮花样品中，异紫堇碱的含量低于其它产地，武都产秃疮花样品中原阿片碱的含量为最高;以异紫堇碱为质量控制指标，确定了秃疮花的最佳采收时间。

目录

声明

摘要

第1章 绪论

1．1 中草药生物碱的研究现状

1．2 生物碱的理化性质

1．2．1 性状

1．2．2 旋光性

1．2．3 酸碱性

1．2．4 溶解性

1．2．5 沉淀反应

1．2．6 显色反应

1．3 生物碱的分类

1．4 生物碱的药物作用

1．4．1 抗肿瘤作用

1．4．2 作用于神经系统

1．4．3 作用于心血管系统

1．4．4 抗菌作用

1．4．5 抗疟作用

1．5 生物碱提取与纯化技术

1．5．1 提取溶剂

1．5．2 溶剂提取法

1．5．3 生物碱的纯化方法

1．6 生物碱的测定方法

1．6．1 滴定法

1．6．2 分光光度法

1．6．3 红外光谱法

1．6．4 薄层扫描法

1．6．5 气相色谱法

1．6．6 高效液相色谱法

1．6．7 毛细管电泳法

1．7 秃疮花的药理作用

1．7．1 抗菌、抑菌作用

1．7．2 抗溶血和改善微循环的作用

1．7．3 对中枢和平滑肌的抑制作用

1．7．4 对心肌细胞的作用

1．7．5 对小鼠肝损伤的保护作用

1．7．6 提高机体免疫力的作用

1．7．7 其它作用

1．8 本课题研究的目的、意义和主要内容

1．8．1 本课题研究的目的和意义

1．8．2 本课题研究的主要内容

第2章 秃疮花生物碱的提取分离

2．1 前言

2．1．1 秃疮花概况

2．1．2 化学成分研究

2．2 材料与方法

2．2．1 仪器

2．2．2 试剂

2．2．3 试药

2．3 实验方法与结果分析

2．3．1 提取分离

2．3．2 结果分析

2．4 本章小结

第3章 RP-HPLC·法测定异紫堇碱的含量

3．1 前言

3．2 材料与方法

3．2．1 仪器

3．2．2 试剂和材料

3．2．3 试药

3．3 实验方法

3．3．1 溶液的配制

3．3．2 色谱条件的优化

3．3．3 方法学验证

3．4 本章小结

第4章 秃疮花生物碱的RP-HPLC-DAD含量测定方法

4．1 前言

4．2 材料与方法

4．2．1 仪器

4．2．2 试剂和材料

4．3 实验方法

4．3．1 对照品溶液的制备

4．3．2 样品溶液的制备

4．3．3 色谱条件的选择

4．3．4 提取条件的优化

4．3．5 色谱含量测定方法学考察

4．4 含量测定

4．6 本章小结

结论

参考文献

致谢

附录A(攻读硕士学位期间所发表的论文)

附录B(附图)