mTOR/p70S6K信号通路在小儿血管瘤演变中的作用

摘要

目的：探讨mTOR/p70S6K信号通路在小儿血管瘤的发生、发展及消退过程中的作用。
　　 方法：
　　 1.收集遵义医学院附属医院2005年-2009年未经其他治疗、单纯行手术切除并经病理诊断为血管瘤的标本31例，结合Mulliken分类法与增殖细胞核抗原（PCNA）表达对血管瘤进行分类和分期，免疫组化检测并比较增生期血管瘤和消退期血管瘤组织中mTOR、p70S6K-α的表达水平。
　　 2.用组织块法培养血管瘤内皮细胞，待长成单层细胞以后传代，建立血管瘤血管内皮细胞系，观察其增殖特征，并用第Ⅷ凝血因子相关抗原进行鉴定。同步化培养血管瘤内皮细胞，采用Western blot法检测血管瘤内皮细胞mTOR、p70S6K-α的表达水平，同期用流式细胞仪检测血管瘤血管内皮细胞周期的变化；并分析mTOR、p70S6K-α的表达水平与血管瘤血管内皮细胞周期的分布及细胞凋亡的相关性。
　　 3.待细胞处于对数生长期，换无血清培养液孵育48h使细胞同步化，然后分别加入O，雷帕霉素10nmol/L，继续孵育24h，细胞刮刀收集细胞，检测血管瘤内皮细胞mTOR、p70S6K-α的表达水平，同时检测血管瘤血管内皮细胞周期的分布。
　　 结果：
　　 1.18例增殖期血管瘤mTOR、p70S6K-α的积分光密度分别为6336.48±1655.89，588.72±223.87；13例消退期血管瘤mTOR、p70S6K-α的积分光密度分别为846.22±297.09，3235.64±947.77；血管瘤增殖期p70S6K-α的积分光密度明显低于消退期，差异有显著性（P<0.01）；血管瘤增殖期mTOR.的积分光密度明显高于消退期，差异有显著性（P<0.01）。
　　 2.培养的血管瘤内皮细胞于4天后开始贴壁生长，一周后只有少量细胞铺展贴壁生长，两周后开始生长分裂，三周后细胞歼始快速生长，四周后细胞铺满板底。用相差倒置显微镜观察，发现所分离的内皮细胞呈上皮细胞形态。培养细胞第Ⅷ凝血因子相关抗原表达为阳性。
　　 3.mTOR蛋白表达水平较高，p70S6K-α蛋白表达水平较低时，处于G0/G1期的细胞较少（55.95±4.38）％；mTOR蛋白表达水平下降，p70S6K-α蛋白表达水平升高，处于Go/G1期的细胞明显增多（77.86±8.18）％。
　　 4.雷帕霉素作用于体外培养血管瘤血管内皮细胞24小时后，细胞周期变阻滞在G1期，雷帕霉素作用前后差异具有显著性（P<0.01）；mTOR蛋白表达水平下降（P<0.01）；p70S6K-α蛋白表达水平升高（P<0.01）。
　　 结论：
　　 1.在血管瘤增生期mTOR高表达可能导致p70S6K-α的活化磷酸化，促进血管瘤血管内皮细胞由G0/G1进入S期，血管瘤呈快速增殖状态。而在血管瘤消退期，在某种机制作用下，mTOR表达减少，抑制了p70S6K-α的磷酸化，使细胞周期阻滞在G0/G1期，进而促进血管瘤血管内皮细胞凋亡，血管瘤表现出自然消退的趋向。
　　 2.体外培养的血管瘤内皮细胞中，mTOR高表达导致p70S6K的活化磷酸化，促进血管瘤血管内皮细胞由G0/G1进入S期，血管内皮细胞快速增殖；mTOR表达减少，抑制了p70S6K的磷酸化，细胞周期阻滞在G0/G1期，进而促进血管内皮细胞凋亡。
　　 3.雷帕霉素可将体外培养的血管瘤内皮细胞滞留于G0/G1。

目录

文摘

英文文摘

英文缩写词

前言

第一部分 mTOR/p70S6K信号通路在小儿血管瘤中的表达及意义材料与方法

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分 mTOR/p70S6K信号通路在体外培养小儿血管瘤血管内皮细胞中的表达

实验一血管瘤内皮细胞体外培养

材料与方法

结果

实验二mTOR/p70S6K信号通路在体外培养血管瘤血管内皮细胞中的表达

材料与方法

结果

讨论

全文结论

参考文献

综述

参考文献

致谢