四种绿绒蒿属植物内生真菌及发酵产物活性研究

摘要

内生菌是普遍存在于健康植物组织内部的一大类微生物。植物内生菌能够产生与宿主相同或相似的化学成分，大多数植物体内均有内生菌，并且这些内生菌表现出了丰富的生物活性。绿绒蒿属植物含有丰富的化学成分，且具有多种药理作用,至今未见绿绒蒿属植物内生菌方面的研究报道。鉴于此我们选用四种绿绒蒿属植物黄花绿绒蒿(Meconopsis chelidonifolia)、红花绿绒蒿(M. punicea)、蓝花绿绒蒿(M. henrici)、全缘叶绿绒蒿(M. integrifolia)作为植物材料，对绿绒蒿属植物的内生真菌及其代谢产物的生物活性进行研究。
　　采用组织块分离法及研磨法从四种绿绒蒿中共分离得到49株内生真菌，并对其中12株产孢的内生真菌进行了形态鉴定。鉴定结果表明：它们分别属于青霉属Penicillium(4株)、粘帚霉属Gliocladium(2株)、链格孢属Alternaria(2株)、假丝酵母属Candida(1株)、毛霉属Mucor(1株)，小单头孢霉属Acremoniella(1株)和线孢盘菌属Ostropa(1株)。
　　对49株内生真菌的发酵液分别用乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，对菌体用甲醇提取，共得到147个样品。对24株菌的胞外多糖和胞内多糖进行提取，共得到48个多糖样品。并测定了多糖含量，其中菌株 YS101胞外多糖最多，为0.8856g，（250mL发酵量）。
　　发酵产物抗氧化活性结果表明：萃取和提取得到的147个样品中13个样品总还原能力维生素 C相当含量超过200μg/mg，11个样品 DPPH清除率达到80％，羟自由基清除率普遍较低。48个多糖样品中有6种多糖样品DPPH自由基清除活性超过30%。有8种多糖样品羟自由基清除率超过30%，并且都是胞外多糖。
　　采用滤纸片法对绿绒蒿49株内生真菌发酵产物进行抑菌活性测定，测定结果表明：各提取物溶液浓度为10mg/mL时乙酸乙酯部位抑菌效果明显高于甲醇部位及正丁醇部位。其中YR202乙酸乙酯部位、QL205甲醇部位和RL201正丁醇部位抑菌活性最显著。
　　对菌株YL201乙酸乙酯萃取部位进行分离，得到1个化合物，经鉴定为2-乙酰基-4(3H)喹唑酮。对抗氧化活性较好的5株菌进行了分子生物学方法鉴定，结果表明：他们分别属于青霉菌属Penicillium(YL202、YL201)、镰刀菌属Fusarium(RL201)、链格孢属Alternaria(RL207)、念珠菌属Candida(QL205)。

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第1章 绪论

1.1绿绒蒿研究概况

1.2植物内生菌研究概况

1.3本研究的目的及意义

第2章 绿绒蒿属植物内生真菌的分离、纯化及形态学鉴定

2.1实验材料

2.2实验方法

2.3 结果

2.4讨论

第3章 绿绒蒿属植物内生真菌次级代谢产物生物活性研究

3.1实验材料

3.2实验方法

3.3结果与分析

3.4讨论

第4章 次级代谢产物化学成分研究及生物活性检测

4.1实验材料

4.2实验方法

4.3结果与分析

4.4讨论

第5章 内生真菌分子生物学鉴定

5.1实验材料

5.2实验方法

5.3结果与分析

5.4讨论

结论

参考文献

致谢

附录A （化合物鉴定谱图）

附录B （测序菌株18S rDNA ITS序列测序结果）