抗原诱导后小鼠Treg细胞趋化特性及其对移植皮肤存活的影响

摘要

目的：为了解Treg细胞在抗原诱导下的趋化特性及Treg细胞在体内的趋化与定植特点与移植免疫耐受的关系，为移植免疫耐受诱导提供实验依据。
　　 方法：首先用C57小鼠皮肤抗原及卡介苗诱导Balb/c小鼠，比较1w、2w、3w、4w不同诱导组中CD4+CD25T、与Treg细胞表面趋化因子受体CCR4和CCR6的表达，并用趋化因子CCL4、CCL20、CCL22做趋化试验，动态观察抗原诱导后小鼠脾脏的 Treg细胞趋化特性，挑选与Treg细胞关系较为密切的趋化因子。用免疫磁珠分选同种异体皮肤抗原诱导及未诱导的 Treg细胞，并选用趋化因子CCL20与CCL22进行干预。观察皮肤移植模型中Treg细胞的体内定植与皮肤存活情况。
　　 结果：
　　 1.CCLA趋化下皮肤抗原诱导组CD4+CD25T细胞趋化指数随时间逐渐升高； CD4+CD25+CD127-Treg细胞的趋化指数维持在较低水平，随时间而降低但变化无统计学意义。卡介苗诱导组CD4+CD25-T细胞趋化指数变化趋势同皮肤抗原诱导组；CD4+CD25+CD127-T的趋化指数随时间而降低，1w组显著高于其他各组（p<0.05）。
　　 2.CCL20趋化下皮肤抗原诱导组CD4+CD25T细胞趋化指数随时间而升高，3、4w后明显高于CD4+CD25+CD127-T细胞（p<0.05）。卡介苗诱导组CD4+CD25-T细胞4w时的趋化指数要显著高于其它时间点（p<0.05）。CD4+CD25+CD127-T细胞的趋化指数在各时间点均比CD4+CD25-T细胞高（p<0.05）。
　　 3.CCL22趋化下皮肤抗原诱导组CD4+CD25-T前3w随时间而增高，第3w达高峰；CD4+CD25+CD127-T细胞的趋化指数在第1w显著高于CD4+CD25-T组（p<0.05）。卡介苗诱导组前3wCD4+CD25+CD127-T细胞比CD4+CD25-T趋化指数高（p<0.05），第4w时各细胞亚群趋化指数变化无统计学意义（p>0.05）。
　　 4.CCL4趋化下皮肤抗原诱导组与卡介苗诱导组Treg细胞的趋化指数都随着时间的延长有下降的趋势。皮肤抗原诱导组在不同时间点的变化无统计学意义（p>0.05），卡介苗诱导组则在第1w趋化指数比第2w、第3w与第4w明显要高（p<0.05）。
　　 5.CCL20趋化下皮肤抗原诱导组Treg细胞的趋化指数在第2w比第1w、第3w高（p<0.05），第4w组趋化指数比第3w组高（p<0.05）。而卡介苗诱导组Treg细胞的趋化指数随时间的延长而升高，在第4W达到最高峰（p<0.05）。
　　 6.CCL22趋化下皮肤抗原诱导组及卡介苗诱导组Treg细胞的趋化指数总体呈下降趋势。
　　 7.锝标记的抗原诱导Treg细胞自体皮片皮下注射后，其异体皮片的放射性活度百分率是自体皮片的6倍，而未诱导Treg细胞自体皮片皮下注射后，自体皮片放射性活度百分率为93.28％。
　　 8.所有经Treg进行干预的小鼠，其异体皮肤存活时间均长于手术对照组（p<0.05）。同种异体抗原诱导Treg在趋化因子CCL20或CCL22存在下异体皮肤存活时间显著高于单纯使用Treg小鼠。两趋化因子干预组之间无显著性差异。未经抗原诱导Treg组、趋化因子CCL22组及CCL20组之间皮片存活时间无统计学意义（p>0.05）。
　　 结论：1.CD4+CD25+CD127-T表面趋化因子受体的表达因抗原而异，趋化行为也不相同。卡介苗诱导后CD4+CD25+CD127-T的趋化行为比皮肤匀浆抗原诱导的Treg更为活跃。
　　 2.同一抗原作用下，CD4+CD25+CD127-T与CD4+CD25-T细胞表面趋化因子受体的表达变化趋势相似，但趋化效率不同。
　　 3.CD4+CD25+CD127-T表面趋化因子受体的表达变化趋势与相应趋化因子所致趋化反应的效率并不同步，提示趋化效率的高低可能与趋化因子受体的活性状态关系更为密切。
　　 4.不同趋化因子对CD4+CD25+CD127-T的趋化效率与CD4+CD25+CD127-T活化时期有关。
　　 5.移植局部直接给予Treg，其定植效果优于尾静脉注射方式。用Treg细胞进行移植干预，在局部使用法可能达到更好的疗效。
　　 6.抗原诱导后的比未诱导Treg细胞在移植局部的定植更好，抗原信号可能是吸引Treg向移植局部游走与定植的最主要因素。
　　 7.加入趋化因子CCL20或CCL22干预后，调节性T细胞可以更好的发挥负向免疫调节作用，延长移植皮肤的存活时间。

目录

文摘

英文文摘

英文缩略词表

前 言

第一部分 不同抗原诱导Treg细胞的体外趋化试验

材料与方法

结 果

讨 论

结 论

第二部分 小鼠同种异体皮肤移植模型中Treg细胞的定植与皮肤存活情况观察

材料与方法

结 果

讨 论

结 论

参考文献

致 谢

综 述

参考文献

附 录

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