胆固醇对人内皮细胞DNA的损伤及绞股蓝总苷的保护作用

摘要

目的:研究胆固醇对人内皮细胞DNA的损伤及绞股蓝总苷的保护作用。
　　 方法:1.培养并鉴定人脐静脉内皮细胞株(CRL-1730)。2.三种方法检测γH2AX:用12.5mg/L,25mg/L,50mg/L胆固醇作用于人脐静脉内皮细胞12小时,免疫荧光法观察细胞中γH2AX形成的焦点;Westernblot及流式细胞术检测细胞内γH2AX表达量变化。3.先用NAC(10mM)或1μg/mL,10μg/mL,100μg/mL,绞股蓝总苷预作用细胞1小时,再用50mg/L胆固醇作用细胞12小时,免疫荧光法观察细胞中γH2AX形成的焦点,Westernblot检测细胞内7H2AX表达量变化:流式细胞术检测细胞内活性氧的变化。
　　 结果:1.成功培养了人脐静脉血管内皮细胞株(CRL-1730),经免疫荧光鉴定为内皮细胞。2.不同浓度的胆固醇作用人脐静脉内皮细胞12小时后,免疫荧光结果显示不同浓度的胆固醇均可诱导细胞内γH2AX形成焦点,随着胆固醇浓度的增加,γH2AX形成焦点的荧光强度也逐渐增强;Westernblot结果及流式细胞术结果表明,胆固醇作用后细胞内γH2AX表达量随胆固醇浓度增大而增强。3.用NAC或绞股蓝总苷预作用细胞后,免疫荧光结果显示随着绞股蓝总苷的浓度的增大,细胞内的γH2AX形成的焦点荧光强度逐渐减弱,与50mg/L胆固醇作用组比较,差异具有统计学意义:Westernblot结果结果表明,细胞内γH2AX表达量随绞股蓝总苷浓度增大而减弱,与50mg/L胆固醇作用组比较,差异具有统计学意义;流式细胞术结果显示细胞内活性氧水平均明显降低,且随着绞股蓝总苷的浓度的增大,细胞内的活性氧水平逐渐降低,与50mg/L胆固醇作用组比较,差异具有统计学意义。
　　 结论:1、胆固醇通过升高人脐静脉内皮细胞中ROS水平,导致DNA损伤。2、GPs通过降低细胞内ROS水平减轻胆固醇所致的细胞DNA损伤。