甲型流感病毒唾液酸受体的定性及定量分析以及小鼠流感基因在人体的表达

摘要

第一部分
　　 目的：探讨流感病毒受体唾液酸α2，3-半乳糖(SAα,2，3-gal)和唾液酸α2，6-半乳糖（SAα2，6-gal）在宿主体内的分布，利用免疫荧光组织染色技术检测并定性、定量分析人、小鼠、鸡及鸭的流感病毒唾液酸受体分布。
　　 方法：采用目前国际上作为流感病毒唾液酸受体特异性识别的植物凝集素MAA-Ⅰ（forSAα2，3galbl，4GlcNac）、MAA-Ⅱ（forSAα2，3galbl，3GlcNac）、SNA（forSAα2，6-gal）作为一抗，PBS作为阴性对照，荧光素FluoresceinAvidinDCS标记观察细胞核DAPI染色，对人、小鼠、鸡及鸭进行流感病毒唾液酸受体的检测并进行系统的定性及定量分析，比较两种分析方法的结果。
　　 结果：定性分析实验结果显示SAα2，3-gal在人气管上皮中没有表达，SAα2，6-gal在鸡气管上皮中无表达，而定量分析实验结果显示三种凝集素标记的受体几乎在小鼠、人、鸡和鸭气管和肺组织中均有表达，只是其表达的阳性率有差别。讨论定性分析结果与以往的研究结果基本一致，但定性分析与定量分析结果有差异，原因可能是传统研究未采用定量的方法，其结果受研究者个人的主观性因素等影响，另一方面提示流感病毒受体在气管和肺组织中的分布情况并不是以往人们所认为的简单的有和无之间的区别，而是一种表达数量上多和少的差别。同时，我们的结果还显示了流感病毒唾液酸受体在人、小鼠、鸡及鸭气管和肺组织中并不是均匀分布的。
　　 结论：通过对定性与定量检测结果的对比分析，我们认为用定量的方法来分析研究免疫组化或免疫荧光的染色结果是十分必要的，也能够得到更为准确的反应流感病毒唾液酸受体分布与表达的情况。
　　 第二部分
　　 目的：为观察小鼠甲型流感(A/H1N1)病毒基因在流感病人血中的有无表达、判断小鼠相关基因与人类病毒感染基因的表达有无一致性。
　　 方法：提取流感患者不同时期外周血淋巴细胞的RNA并反转录成cDNA，用荧光定量PCR检测Gnai2，Spin，Lcp2，Glell，Tnfrsfl9，Rars小鼠流感基因的表达。
　　 结果：Gnai2，Spin，Lcp2，Glell，Tnfrsfl9，Rars6种小鼠流感基因在人流感患者中均有表达变化，并且在流感感染的不同时期其表达也不同。讨论：在小鼠表达的流感基因在人中也有表达，说明小鼠流感基因的表达与流感病毒感染人时所表达的基因有一定的一致性，提示在感染流感病毒后，小鼠和人均可表达的这些基因或许可以作为诊断流感病毒感染的特异性基因指标物。
　　 结论：人类感染流感病毒后有相应基因的表达，而且人类流感病毒基因的表达与小鼠流感病毒基因的表达有一定的一致性。本研究为进一步了解人畜共患病的共同基因及其免疫调节机制奠定了基础。