内质网应激通过下调C-Met表达抑制人肝细胞株L细胞生长和增殖

摘要

目的：人体肝脏有很强的再生能力，在多数病理条件下能通过肝再生修复肝组织损伤，肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor，HGF)通过与其受体c-Met结合促进肝细胞增殖是肝再生过程中的重要环节。近几年的研究提示内质网应激(endoplasmicreticulum stress，ER stress)是存在于多种肝脏疾病的一种病理状态，但对ER stress对肝细胞生长、增殖的影响及机制尚不清楚。本研究的目的是探讨ER stress对肝细胞生长、增殖的影响及机制。
　　 方法：1、以人正常肝细胞株LO2为研究对象，用2μM毒胡萝卜素(thapsigargin，TG)诱导ER stress，用4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid，PBA)抑制内质网应激反应，用蛋白免疫印迹方法(western blotting，WB)检测葡萄糖调节蛋白78(glucoseregulated protein78，GRP78)的表达以判断ER stress；2、ER stress对LO2细胞生长增殖及HGF刺激的影响。用TG诱导肝细胞ER stress，观察肝细胞生长和增殖改变，进一步观察PBA抑制ER stress及HGF刺激后肝细胞生长和增殖改变。采用四甲基偶氮唑盐[3-(4，5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3，5-di-phenytetrazoliumromid，MTT]、TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)法分别检测不同时间点细胞增殖率及凋亡率；3、内质网应激对LO2细胞HGF受体c-Met表达的影响。用TG诱导肝细胞ER stress，并用PBA干预，用WB法检测不同时间肝细胞内c-Met表达，用反转录PCR(reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)检测c-Met mRNA表达。
　　 结果：1、LO2细胞经2μM TG诱导6h后GRP78表达逐渐增强，36h达到高峰，PBA后可部分减弱TG对GRP78的诱导；2、2μM TG处理24h后LO2细胞生长、增殖受到明显抑制，与正常对照组比较有显著意义(P<0.05)，而细胞凋亡指数在36h内与正常对照组比较无明显增加，PBA可部分减轻TG对肝细胞生长增殖的抑制作用。TG明显降低LO2细胞对HGF刺激的敏感性，PBA可部分增加TG处理的LO2细胞对HGF刺激的敏感性；3、TG处理6h后LO2.细胞c-Met蛋白表达明显下降，PBA可部分减弱TG下调c-Met表达的作用。TG处理24h后明显降低c-Met mRNA表达。
　　 结论：内质网应激通过下调c-Met mRNA及蛋白表达抑制LO2细胞生长和增殖。