ⅡfimaA型牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人脐静脉内皮细胞产生内皮素-1和一氧化氮的影响

摘要

目的:分析ⅡfimA型牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis）脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelialcells,HUVECs)分泌缩血管因子内皮素-1(endothelin-1,ET-1)及舒血管因子一氧化氮(nitric oxide,NO)的可能的影响。
　　 方法:1.标准条件下厌氧培养并鉴定ⅡfimA型(WCSP115) P.gingivalis,采用iNtRON试剂盒提取ⅡfimA型P.gingivalis-LPS,应用SDS-PAGE+银染、鲎试验对提取的脂多糖予以鉴定;2.体外培养HUVECs(CRL-2480),细胞单层融合后,加入不同终浓度的ⅡfimA型P.gingivalis-LPS(0.5μg/ml,1.0μg/ml,2.0μg/ml,5.0μg/ml,10.0μg/ml)共同培养2、8、24、48小时,分别采用硝酸还原酶法和ELISA法检测培养上清液中NO和ET-1的水平。实验过程中设阴性对照组（空白）及阳性对照组(E.coli-LPS)。
　　 结果:1.在ⅡfimA型P.gingivalis-LPS刺激下,HUVEC分泌ET-1的量增加,与阴性对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05)。ⅡfimA型P.gingivalis-LPS对HUVECs的刺激作用具有时间依赖性;随刺激时间延长,ET-1分泌量增加,至观察期末(48h)分泌量达峰值。在刺激早期(2h、8h),HUVECs分泌ET-1的量随ⅡfimA型P.gingivalis-LPS浓度的升高有下降的趋势,但在刺激晚期(24h、48h),ET-1分泌量随P.gingivalis-LPS浓度升高有上升的趋势。
　　 2.在ⅡfimA型P.gingivalis-LPS刺激下,HUVEC分泌NO的量增加,与阴性对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05)。ⅡfimA型P.gingivalis-LPS对HUVECs的刺激作用具有时间和浓度依赖性,至观察期末(48h) NO释放水平达到高峰。
　　 结论:ⅡfimA型P.gingivalis-LPS能够刺激HUVECs分泌ET-1增多,随着浓度的升高,LPS刺激HUVEC分泌ET-1的量略有下降趋势;ⅡfimA型P.gingivalis-LPS能够刺激HUVECs释放NO的量增高,刺激作用不仅存在时间依赖性还存在浓度依赖性。提示ⅡfimA型P.gingivalis-LPS可能通过刺激HUVECs,使其ET-1和NO分泌量异常,破坏内皮细胞正常生理功能,损伤内皮细胞,参与As的发生发展过程。

目录

声明

英文缩略词对照表

摘要

前言

材料和方法

1 材料、仪器设备和试剂配制

2 试验方法

3 统计学分析

3 结果

3．1 P.gingivalis菌株的培养及生化鉴定

3．2 鲎试验结果

3．3 SDS-PAGE鉴定ⅡfimA型P.gingivalis-LPS结果

3．4 内皮细胞的培养

3．5 ⅡfimA型P.gingivalis-LPS刺激HUVECs分泌ET-1的情况

3．6 ⅡfimA型P.gingivalis-LPS刺激HUVECs释放NO的情况

3 讨论

全文总结

参考文献

综述

致谢

作者简历