胆碱酯酶催化活性浓度测量参考方法的建立

摘要

目的:研究胆碱酯酶催化活性浓度测量方法的影响因素,建立胆碱酯酶催化活性浓度测量参考方法。
　　方法:⑴收集近20年国内外胆碱酯酶测量方法,按胆碱酯酶质量和酶催化活性浓度二类胆碱酯酶被测量将其测量方法分类,根据测量方法标准化、自动化的可行性、试剂来源与成本等条件筛选胆碱酯酶测量参考方法的被测量。⑵按胆碱酯酶测量原理将收集的测量方法分类,根据胆碱酯酶测量方法的优越性、测量方法的市场占有率、各测量方法的试剂来源及成本等因素选择适宜的胆碱酯酶测量原理,并以此原理筛选目前市售胆碱酯酶试剂盒,进行测量精密度与线性的评价,初步确定胆碱酯酶测量参考方法的测量原理。⑶根据酶学测量的基础理论、酶学测量参考方法的研究现状、胆碱酯酶催化活性浓度测量的原理和特点,确定影响胆碱酯酶催化活性浓度测量参考方法的测量因素及其最适测量条件。⑷应用经典的单因素分析法,选择影响胆碱酯酶催化活性浓度测量的试剂因素及其最适测量条件。⑸应用响应面分析法优化胆碱酯酶测量参考方法的关键影响因素的测量条件。⑹通过实验验证响应面分析法确定的各关键影响因素最佳测量条件的合理性。
　　结果:⑴胆碱酯酶测量参考方法的被测量为胆碱酯酶催化活性浓度。⑵胆碱酯酶催化活性浓度测量参考方法的测量原理为:丁酰硫代胆碱/DTNB法。⑶胆碱酯酶催化活性浓度测量参考方法的测量因素及最适测量条件为:测量温度37℃、光径1cm、检测波长405nm、摩尔吸光系数13300LM-1cm-1、带宽2nm、样本体积比1:251(0.0040)、延迟时间60s、测量时间90s。⑷采用单因素分析法确定胆碱酯酶催化活性浓度测量参考方法的试剂因素及其测量条件为:丁酰硫代胆碱浓度1.48m mol/L、DTN B浓度0.3m mol/L、缓冲液pH值8.0。⑸应用响应面分析法优化胆碱酯酶催化活性浓度测量参考方法的关键影响因素的测量条件为:丁酰硫代胆碱浓度13.4 mmol/L、DTNB浓度0.29 mmol/L、缓冲液pH8.1。⑹以胆碱酯酶测量参考方法最适测量条件检测临床血清样本催化活性浓度值为8755U/L,为响应面模型理论最高酶催化活性浓度的95％以上。
　　结论:应用单因素及响应面联合分析法可成功筛选出胆碱酯酶催化活性浓度的最适测量条件,建立胆碱酯酶催化活性浓度测量参考方法。

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前言

1 材料

1.1 实验材料

1.2 实验试剂

2 方法

2.1 CHE测量参考方法建立的技术路线

2.2 实验方法

3 结 果

3.1 CHE测量候选参考方法的被测量选择结果

3.2 CHE测量候选参考方法测量原理的选择结果

3.3 影响CHE测量候选参考方法的测量因素及其最适测量条件的选择

3.4 影响CHE测量候选参考方法的试剂因素及其最适测量条件的选择

3.5 应用响应面分析法进一步优化测量条件结果

3.6 验证结果

4 讨 论

4.1 胆碱酯酶测定试剂盒的评价

4.2 胆碱酯酶测量因素及试剂因素的选择

4.3 应用响应面法优化胆碱酯酶测量条件

5 结 论

参考文献

综述

致谢

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