黄芪丹参联合对大鼠失神经骨骼肌萎缩的作用及机制研究

摘要

目的:
　　观察黄芪与丹参联合应用对大鼠失神经骨骼肌萎缩的作用并探讨其可能机制,为临床中药治疗失神经骨骼肌萎缩提供实验基础。
　　方法:
　　健康成年雄性SD大鼠20只,随机分为两组:对照组(A组,n=10)、黄芪和丹参治疗组(B组,n=10)。A、B两组均切断右侧坐骨神经约1cm,建立右后肢失神经腓肠肌萎缩模型。A组术后腹腔注射生理盐水3ml,1次/日;B组术后采用黄芪、丹参注射液各1.5ml混合腹腔注射治疗,1次/日。观察大鼠的活动及饮食饮水情况,分别于术后第2、3周两组各处死5只大鼠取材,检测腓肠肌肌湿重比值、肌纤维横切面积、总蛋白水平、细胞凋亡率及FoXO3a、MAFbx mRNA和蛋白表达水平的变化。
　　结果:
　　1.大体观察:切断坐骨神经建立失神经骨骼肌萎缩模型后,大鼠右后肢运动障碍。
　　2.腓肠肌肌湿重比值:随失神经时间的延长,两组肌湿重比值都呈下降趋势;第2、3周,治疗组肌湿重比值均值均高于对照组,P<0.05,差异具有统计学意义。
　　3.肌纤维横截面积:随着失神经延长,两组肌纤维横截面积都明显减小;第2、3周,治疗组横截面积均值均高于对照组,P<0.05,差异具有统计学意义。
　　4.考马斯亮蓝法测定总蛋白水平:随着失神经延长,两组总蛋白水平逐渐下降;第2、3周,治疗组的总蛋白下降幅度低于对照组,P<0.05,差异具有统计学意义。
　　5.TUNEL检测细胞凋亡率:随着失神经延长,两组的细胞凋亡率都逐渐升高;第2、3周,治疗组的细胞凋亡率均低于对照组,P<0.05,差异具有统计学意义。
　　6.FoXO3a、MAFbx mRNA表达:随着失神经延长,两组FoXO3a、MAFbx mRNA表达均逐渐升高;第2、3周,治疗组FoXO3a、MAFbx mRNA表达均低于对照组, P<0.05,差异具有统计学意义。
　　7. FoXO3a、MAFbx蛋白表达:随着失神经延长,两组FoXO3a、MAFbx蛋白表达均逐渐升高;第2、3周,治疗组FoXO3a、MAFbx蛋白表达均低于对照组,P<0.05,差异具有统计学意义。
　　结论:
　　1.黄芪和丹参联合对大鼠失神经骨骼肌早期萎缩具有明显延缓作用;
　　2.黄芪和丹参联合可降低失神经骨骼肌细胞凋亡率,可能通过抑制细胞凋亡延缓肌萎缩;
　　3.黄芪丹参联合可降低FoXO3a、MAFbx的mRNA及蛋白表达水平,可能抑制二者介导的泛素蛋白酶体降解途径。

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前言

1. 材料与方法

1.1 实验动物

1.2 主要实验试剂

1.3主要仪器设备

1.4主要试剂配制

（1）DEPC水

（2）75%乙醇（用于PCR）

（3）TBST配制

（4）10%分离胶

（5）5%浓缩胶

（6）Western转膜液

1.5实验方法

1.5.1 动物分组

1.5.2模型建立

1.5.3药物干预方法

1.5.4 组织取材

1.5.5 观察与检测项目

1.5.6 统计学处理

2 结果

2.1 肌湿重比值

2.2 肌纤维横截面积

2.3 肌肉总蛋白含量

2.4 骨骼肌细胞凋亡率

2.5FoXO3a、MAFbx mRNA及蛋白的表达

3 讨论

3.1 黄芪和丹参联合对失神经骨骼肌萎缩的作用

3.2 失神经骨骼肌萎缩的机制

结论

参考文献

综述

致谢

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