可溶性CD40配体对THP-1细胞株增殖及Bcl-2、P53 mRNA表达的影响

摘要

目的:探讨可溶性CD40配体(sCD40L)对人急性单核细胞白血病THP-1细胞株增殖、凋亡以及凋亡相关基因BCL-2、P53 mRNA表达的影响。
　　方法:(1)采用CCK-8法检测不同浓度sCD40L对急性单核细胞白血病 THP-1细胞株体外增殖的影响,确定最佳干预浓度;(2)采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;(3)通过实时荧光定量PCR法检测sCD40L对THP-1细胞BCL-2、P53mRNA表达的影响。
　　结果:(1)不同浓度sCD40L对THP-1细胞作用24h、48h、72h小时后均有不同程度的抑制的作用,与细胞对照组相比较,均有显著差异(p<0.05),其中浓度为4μg/ml对急性单核细胞白血病 THP-1细胞抑制作用最明显;同一浓度、不同作用时间下,72h抑制作用最明显。(2)AnnexinV-FITC/PI双染色显示,THP-1细胞与sCD40L组共育24h、48h、72h后,均见明显凋亡,与THP-1细胞对照组相比较有显著差异(P<0.05)。同一浓度、不同时间下,在72h时对THP-1细胞凋亡最明显;(3)实时荧光定量PCR测定结果显示:在同一时间内sCD40L4.00μg/ml组与细胞对照组相比较,Bcl-2mRNA的表达量明显下调,而P53 mRNA的表达明显上调,且与细胞对照组相比较均有显著差异(P﹤0.05);在不同时间内,两种基因的表达量与时间有相关性。
　　结论:(1) sCD40L在体外能够抑制THP-1细胞增殖,诱导THP-1细胞发生凋亡,与作用浓度、时间相关;(2) sCD40L抗白血病作用机制与下调Bcl-2 mRNA表达、上调P53 mRNA表达相关。

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前言

1 材料与方法

1.1 主要实验材料

1.2 主要实验试剂

1.3 主要仪器设备

1.4 实验试剂的配制及分装

2 实验方法

2.1 实验分组

2.2 THP-1细胞培养

2.3 CCK-8检测sCD40L对THP-1细胞体外增殖的最佳干预浓度

2.4 Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡

2.5 实时荧光定量PCR检测 BCL-2和P53表达

2.6统计分析

3 结果

3.1 CCK-8检测sCD40L对THP-1细胞株体外增殖的影响

3.2Annexin V-FITC/PI双染法测定sCD40L对THP-1细胞凋亡影响

3.3实时荧光定量PCR(RT-PCR)测定BCL-2和P53的表达情况

4.结论

参考文献

综述

参考文献

致谢

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