X射线致HT-29、HeLa、GLC-82细胞损伤过程中NADPH氧化酶的作用

摘要

目的：探讨①2Gy X射线辐照使低射线敏感细胞HT-29，中射线敏感细胞HeLa,高射线敏感细胞GLC-82活性的变化。②NADPH氧化酶在X射线诱导HT-29、HeLa、GLC-82细胞损伤过程中的作用。 方法：①选用对数生长期生长良好的上述3种细胞株，将其分为对照组和2Gy X射线辐照组，MTT比色法检测三种细胞存活分数的变化。②将上述3种细胞分为对照组、NADPH氧化酶抑制剂DPI处理组、12Gy X射线辐照组、NADPH氧化酶抑制剂DPI处理联合X射线辐照组四个组。用荧光分光光度计检测细胞内的活性氧(Reactive oxygen species，ROS)变化；再将上述3种细胞分为对照组和12Gy X射线辐照组后，用免疫细胞化学和激光共聚焦显微扫描术(Immunostaining and laser-scanning confocal microscopy)来研究NADPH氧化酶细胞膜亚基gp90phox胞质亚基p47phox的“共定位”，用Western blotting来检测NADPH氧化酶的关键亚基gp91phox辐照前后在细胞中表达量变化情况。 结果：①三种细胞经X射线辐照后，细胞存活分数有明显降低。②在经12 Gy X射线辐照后细胞内ROS明显增加，在用NADPH氧化酶抑制剂处理后再辐照，则细胞内ROS降低到未辐照水平；同时辐照后NADPH氧化酶细胞质亚基’p47phox从细胞质迁移到细胞膜上并和细胞膜亚基gp91phox结合； Western blotting检测结果显示，NADPH氧化酶的关键亚基gp91phox的表达量明显增加。 结论：①2Gy X射线辐照使低射线敏感细胞HT-29，中射线敏感细胞HeLa,高射线敏感细胞GLC-82活性降低。②NADPH氧化酶被X射线激活后所产生的ROS在X射线诱导HT-29、HeLa、GLC-82细胞损伤过程中起促进作用。

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