缺氧诱导因子在胃癌细胞能量代谢实验研究

摘要

目的：探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因沉默对SGC-7901人胃癌细胞增殖、凋亡的影响。
　　方法：
　　1.实验利用脂质体法转染介导的siRNA干扰技术，将干扰序列转染人胃癌SGC-7901细胞，设立干扰组、阴性对照组、空载体组及空白对照组。
　　2.用RT-PCR及Western Blot检测各组HIF-1αmRNA及蛋白的表达，
　　3.MTT比色法观察 HIF-1α基因沉默后 SGC-7901细胞增殖情况，流式细胞仪(FCM)检测HIF-1α基因沉默后SGC-7901人胃癌细胞凋亡的影响。
　　结果：缺氧实验结果显示:缺氧不同时相HIF-lamRNA表达无明显变化(P>0.05),但随缺氧时间延长,HIF-la蛋白表达显著增加(P<0.01)。干扰组在各时间点对HIF-1αmRNA表达的沉默效率均在80％以上，明显高于其他3组(P均＜0.05)；此外，与其他三组相比，干扰组HIF-1α蛋白相对表达量明显降低(P＜0.05)，增殖曲线表明其增殖明显受抑；凋亡率显著升高(P＜0.01)。
　　结论：HIF-1α基因在人胃癌组织中高表达，与胃癌的分化、临床分期、分级、侵袭转移因素相关，说明HIF-1α的信号通路在胃癌的发生、发展和侵袭、转移中有重要作用，可以作为胃癌内缺氧的标志物和胃癌诊断和判断预后的基因筛选指标，有利于改善既往的治疗策略，给肿瘤病人更合理和个性化的治疗。 RNA干扰成功地干涉了HIF-1α调控的糖酵解通路，抑制胃癌细胞生长和能量代谢，诱导细胞凋亡。HIF-1α基因可以作为以胃癌内缺氧为基础和干涉细胞能量代谢为治疗策略的靶点，为肿瘤的治疗提供了新途径和新思路。

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前言

1 材料与方法

1.1 主要实验材料

1.2 主要实验试剂

1.3 实验方法

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 脂质体法siRNA转染人胃癌SGC-7901人胃癌细胞株效率评估

2.2 HIF-1α-siRNA 转染SGC-7901人胃癌细胞后沉默效率mRNA质量鉴定

2.3 转染后各时间点HIF-1α的△△CT及沉默率

2.4 各组HIF-1α蛋白的表达水平

2.5 各组SGC-7901人胃癌细胞的增殖情况

2.6 沉默HIF-1α对SGC-7901人胃癌细胞凋亡的影响

2.7 HIF-1α基因沉默后SGC-7901胃癌细胞内ATP含量的变化

3 讨论

4 结论

4.1.最佳实验条件

4.2.HIF-1α 沉默对人胃癌SGC-7901细胞株生物学特性的影响

4.3. 沉默HIF-1α对SGC-7901人胃癌细胞凋亡的影响

4.4.HIF-1α 沉默对人胃癌SGC-7901细胞株的ATP浓度影响

参考文献

综述:缺氧诱导因子在恶性肿瘤细胞中的能量代谢以及应用

致谢

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