PARK2基因在锰致大鼠纹状体神经细胞功能影响中的作用

摘要

目的：利用慢病毒介导RNAi技术，构建PARK2长时间沉默的神经细胞，研究锰在不同浓度，相同时间条件下对DA能神经元功能的影响。为后期研究PARK2锰致神经毒性效应机制打基础。
　　方法：设计PARK2基因shRNA靶点，采用干扰效率最高的一对shRNA慢病毒干扰载体感染纹状体神经细胞，采用蛋白印迹法（Western Blot）和实时荧光定量（Real Time PCR）方法验证沉默效果。用不同浓度锰（0、300μmol/L和500μmol/L）处理三组大鼠纹状体细胞[单纯锰处理组（Mn）、PARK2 SiRNA干扰对照组（sh-C）及PARK2 SiRNA干扰组(sh)]，用Elisa法检测各组细胞DA水平。
　　结果：PARK2干扰组PARK2 mRNA及表达产物Parkin蛋白较单纯锰处理组及干扰对照组显著下降（P＜0.05）；。结果显示：单纯锰处理组：当锰浓度升高时，500μmol/L、300μmol/L与0相比，DA下降（P＜0.05）；PARK2 SiRNA干扰组：与单纯锰处理组及干扰对照组比较，各浓度锰处理时DA水平均下降（P＜0.05）；而单纯锰处理组及干扰对照组比较，各浓度锰处理时DA水平无差异（P＞0.05）。
　　结论：锰暴露作用下DA能神经元的功能与PARK2的改变密切相关，PARK2及其产物表达降低可以作为锰致神经毒性的效应标志物。

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前言

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.2 主要实验试剂

1.3 主要实验仪器

1.4 主要试剂配制

2 实验方法

2.1构建慢病毒载体PARK2 RNA干扰

2.2 SD大鼠纹状体神经细胞培养

2.3大鼠纹状体神经细胞的慢病毒感染后锰暴露

2.4 Western Blot 检测大鼠纹状体神经细胞PARK2

2.5 Real time PCR检测大鼠纹状体神经细胞PARK2 mRNA

2.6 Elisa测定各组大鼠纹装体细胞多巴胺（DA）水平

3 结果

3.1 PARK2RNAi质粒的构建

3.2慢病毒感染纹状体细胞

3.3 大鼠纹状体细胞鉴定

3.4 各组大鼠纹状体细胞PARK2 mRNA及蛋白的表达水平

3.4 各组大鼠纹状体细胞外液DA水平

4 讨论

4.1 大鼠纹状体细胞的分离培养及鉴定

4.2 纹状体细胞锰暴露后DA能神经元功能影响与PARK2的联系

5结论

参考文献

综述: Parkin蛋白研究进展

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