前列腺癌中RANK/RANKL/OPG的表达与前列腺癌侵袭及骨转移的关系

摘要

目的：前列腺癌是男性泌尿生殖系统肿瘤中最重要的一种。前列腺癌也是最易发生骨转移的恶性肿瘤，超过80％的前列腺癌患者会发生骨转移，RANK/RANKL/OPG系统最初在骨组织中被发现，且与骨组织吸收、调节有关：RANKL与RANK结合，通过一系列的级联反应和信号传导，可促进破骨细胞的分化、活化与存活。OPG是RANKL的可溶性诱骗受体，OPG通过与RANKL结合从而阻止RANKL与RANK的结合，阻止破骨细胞分化、活化。其中RANKL以跨膜蛋白及可溶蛋白两种形式存在，RANK只以跨膜蛋白形式存在，OPG只以可溶蛋白形式存在。近几年有报道RANK/RANKL/OPG与一些肿瘤包括前列腺癌的发生、发展有关。此外有研究表明RANKL/RANK信号途径还具有趋化作用。而RANK/RANKL/0PG与前列腺癌发生侵袭及骨转移的关系至今未见全面的报道。
　　 方法：
　　 1.选取前列痛患者的组织标本70例，前列腺增生组织20例，用免疫组化法测定前列腺癌组织中RANK、OPG、RANKL的表达，分析组织中RANK、RANKL、OPG的表达水平与前列腺癌临床病理特征及转移的关系。
　　 2.对其中40例前列腺癌、20例前列腺增生病人血清、组织中OPG、sRANKL的表达水平进行了ELISA检测。分析血清及组织中sRANKL、OPG的表达水平与临床病理特征及转移的关系；血清与组织中sRANKL、OPG表达的相关性。
　　 3.选用三种人类前列腺癌细胞株：PC3、DU145、LNCaP及人类正常前列腺细胞株RWPE2，用Western、RT-PCR法检测了其中RANK的蛋白及mRNA表达情况。
　　 4.在Transwell侵袭试验做细胞因子sRANKL对前列腺癌细胞株PC3、DU145、LNCaP，正常前列腺细胞株RWPE2侵袭性影响，观察OPG对其侵袭能力的影响。
　　 5.RANK的RNA干扰实验进一步明确RANK/RANKL途径对细胞侵袭性的影响：特异性靶向RANK的小干扰RNA，将其转染至前列腺癌细胞系中，用Transwell侵袭试验观察RANK基因被沉默对前列腺癌细胞侵袭性的影响。
　　 结果：
　　 1.免疫组化染色显示：RANK、RANKL、OPG蛋白在良性前列腺增生中不表达、或少量微弱表达，在前列腺癌组织中高表达。在发生淋巴结转移的前列腺癌、高水平PSA、高表达AR的前列腺癌中，RANK、RANKL、OPG的表达水平增高(P＜0.05)。而在前列腺癌骨转移时RANK、RANKL、OPG的表达水平显著增高(P＜0.01)。
　　 2.ELISA结果显示；组织中sRANKL、OPG在前列腺癌中的表达高于前列腺增生组织(P＜0.05)。前列腺癌组织中sRANKL、OPG的表达在发生骨转移的、高水平PSA、高表达AR的前列腺癌中，表达水平增高(P＜0.05)。血清中OPG在前列腺癌中的表达高于前列腺增生组织(P＜0.05)。在发生骨转移的、高水平PSA、高表达AR的前列腺癌中，血清OPG水平增高(P＜0.05)；而血清sRANK的表达在前列腺癌及前列腺增生中无明显差异，sPANKL在前列腺癌的表达与年龄、Gleason评分、肿瘤分期、PSA水平、AR的表达情况均无关。血清OPG与组织中OPG含量存在正相关.回归方程为：y=0.9588x+0.4512(R2=0.7504，P＜0.05)。血清RANKL水平和组织RANKL水平未见明显相关性。
　　 3.用Western blot、RT-PCR检测前列腺癌细胞系PC3、DU145、LNCaP及正常前列腺细胞系RWPE2中RANK蛋白及mRNA表达情况的表达：在前列腺癌细胞系中RANK蛋白及mRNA水平均显著高于正常前列腺细胞系中表达。
　　 4.Transwell侵袭实验观察RANKL、OPG对前列腺癌细胞侵袭性的影响：2.5μg/mlRANKL可显著提高RANK高表达的PC-3、LnCap、DU145细胞系的侵袭能力(P＜0.05)，对RANK低表达的RWPE2细胞系的侵袭能力无影响。2.5μg/mlRANKL+10μg/mlOPG可抑制由RANKL提高的侵袭能力(P＜0.05)。
　　 5.特异性靶向RANK的小干扰RNA，RANK基因被沉默后，用transwell侵袭实验进一步明确RANK/RANKL信号途径对前列腺癌细胞侵袭性的影响：在三种前列腺癌细胞株中，SiRNA-2从10pg/ml浓度就可以显现出抑制侵袭效果；100pg/ml浓度可以显示出显著的抑制侵袭效果(P＜0.05)。
　　 结论：
　　 1.前列腺癌组织中RANKL、RANK、OPG表达与前列腺癌的发生、侵袭、转移密切相关。前列腺癌组织中sRANKL、OPG水平及血清中OPG水平与前列腺癌的发生、侵袭、骨转移密切相关。血清OPG与组织中OPG含量存在正相关。
　　 2.sRANKL能增强RANK阳性表达的前列腺癌细胞株的侵袭性，OPG做为RANKL的可溶性诱骗受体，阻止RANKL与RANK结合，能起到抑制前列腺癌细胞的侵袭性和骨转移的作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略表语

声明

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

攻读学位期间发表论文目录

致谢

附图