人肺腺癌放射抗拒细胞株H1299R的建立及miR-183调控HIF-1α影响H1299R放射敏感性的初步研究

摘要

目的：在乏氧微环境中，肿瘤细胞可通过缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）高表达来维持其氧和代谢的稳定，促进自身生长和转移，从而产生放疗抵抗导致治疗失败。有报道发现 miR-183可调控 HIF-1α，但它们与放射敏感性之间的关系尚未阐明。本研究将在建立人肺腺癌细胞放射抗拒模型的基础上，通过干预miRNA-183的表达，观察细胞放射敏感性的变化，初步探讨miR-183与HIF-1α在放疗抵抗中的关系。
　　方法：分别通过常规分割法与亚致死剂量法诱导出人肺腺癌H1299放射抗拒细胞，克隆形成实验验证放射抗拒性，流式细胞仪检测细胞周期与凋亡；慢病毒转染H1299放射抗拒细胞，RT-PCR分别检测miR-183、HIF-1αmRNA表达，CCK-8实验检测细胞增殖情况。
　　结果：常规分割法（2 Gy）照射15次后的H1299R-2 Gy细胞SF2、D0等放射敏感性参数较亲本细胞倍数最多，细胞存活肩区最宽，放射抗拒性最强，命名为H1299R细胞；CCK-8实验及流式实验结果显示，H1299R细胞与亲本H1299细胞相比具有显著的放射抗拒性（P<0.05）；RT-PCR检测H1299R细胞中miR-183与HIF-1αmRNA水平相对 H1299细胞均呈高表达（P<0.05）；将下调 miR-183的慢病毒转染 H1299R细胞后，HIF-1αmRNA的水平也相对呈低表达（P<0.05），增殖曲线表明下调miR-183后H1299R细胞对X射线的敏感性与对照组相比无显著差异（P>0.05）。
　　结论：常规分割照射法可以成功构建人肺腺癌抗拒细胞株，抗拒株相对亲本株对 X射线具有更强的放射抵抗性；肿瘤细胞对 X射线抗拒与 HIF-1α的高表达有关，且miR-183可能通过调控HIF-1α的表达影响肿瘤细胞的放射敏感性。

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前言

1 材料与方法

1.1 主要实验材料

1.2 主要实验试剂

1.3 主要实验设备

1.4 引物设计与合成（所有引物）

1.5 实验方法

1.6 统计学方法

2 结果

2.1 放疗抵抗模型的建立

3 讨论

3.1 人肺腺癌细胞放射抗拒模型的建立

3.2 放射抗拒细胞模型生物性状的观察

3.3 miR-183调控HIF-1α影响放射敏感性的研究

4 结论

参考文献

综述: miRNA与肿瘤放射敏感性关系的研究进展

致谢

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