氯胺酮后处理及其联合缺血后处理对大鼠肝脏再灌注损伤的作用

摘要

目的：随着手术范围不断扩大以及器官移植、心脏手术的广泛开展，如何减轻再灌注损伤一直是目前研究的重点。许多实验证实氯胺酮预处理以及缺血后处理可以减轻再灌注损伤，本实验研究氯胺酮后处理对肝脏再灌注损伤的作用；同时还研究氯胺酮后处理与缺血后处理两种方法联合应用对肝脏再灌注损伤的作用。
　　 方法：选取雄性SD大鼠24只，体质量为200-230g。按照完全随机分组方法分为假手术组(Sham组，n=6)、损伤组(IR组，n=6)、氯胺酮后处理组(Ket组，n=6)、氯胺酮后处理联合缺血后处理组(Ket+Ipo组，n=6)。按照NautaRJ介绍的方法建立肝脏缺血再灌注损伤模型，用无创小血管夹阻断肝脏左叶、中叶肝带结构造成肝脏70％的缺血，不阻断右肝叶、乳头叶、方叶和尾状叶血流以免胃肠道淤血。Sham组仅分离肝十二指肠韧带，1小时后由尾静脉推注NS1ml/kg。IR组在缺血1小时后松开血管夹进行再灌注，同时由尾静脉推注NS1ml/kg。Ket组和Ket+Ipo组在缺血1小时后恢复灌注时，Ket组由尾静脉推注1％氯胺酮10mg/kg，Ket+Ipo组由尾静脉推注1％氯胺酮10mg/kg的同时对肝脏进行缺血后处理。缺血后处理的方法，开放10s缺血10s，反复进行6个周期的循环。再灌注4小时后采集下腔静脉血测定ALT、AST，测肝组织匀浆SOD、MDA，取肝组织作免疫组化检测Bcl-2和Bax的表达和透射电镜观察损伤程度。
　　 结果：与Sham组比较，IR组ALT、AST、MDA均升高(P＜0.05)，Bax表达加强Bcl-2表达减弱(P＜0.05)。与IR组比较Ket组和Ket+Ipo组ALT、AST、MDA均明显下降、SOD明显升高(P＜0.05)，其Bcl-2表达增强，Bax表达减弱(P＜0.05)。与Ket组比较，Ket+Ipo组ALT、AST、SOD、MDA以及Bcl-2、Bax表达没有统计学意义。肝脏组织透射电镜下观察结构变化，Sham组线粒体，细胞核未见明显变化；IR组可见线粒体严重肿胀，异染色质增加；与IR组比较Ket组和Ket+Ipo组线粒体肿胀减轻，核异染色质减少。
　　 结论：氯胺酮后处理可以减轻大鼠肝脏再灌注损伤，但是联合缺血后处理其保护效应并没有加强。保护途径通过清除氧自由基，增强Bcl-2表达抑制Bax表达实现。

目录

文摘

英文文摘

声明

前 言

背景回顾

1.肝缺血再灌注损伤概述

2.缺血后处理与缺血再灌注损伤

2.1缺血后处理减少活性氧的产生

2.2缺血后处理抑制钙超载

2.3缺血后处理抑制中性粒细胞的活化

2.4缺血后处理促进内源性腺苷的释放

2.5缺血后处理促进内源性一氧化氮的释放

2.6缺血后处理激活再灌注损伤补救激酶(RISK)通路

2.7缺血后处理抑制细胞凋亡

3.氯胺酮与缺血再灌注损伤

3.1对神经系统再灌注损伤的作用

3.2对其他脏器再灌注损伤的作用

3.3 临床应用

4.结语

材料与方法

1.研究对象

1.1样本量含量的估算

1.2动物选择及实验分组

1.3 70%肝脏缺血模型的制备

2.标本采集和指标测定

2.1 血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)测定

2.2肝组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量测定

2.3电镜标本取材

2.4免疫组化标本取材

3.主要试剂与仪器

3.1主要试剂

3.2主要实验仪器

4.肝组织石蜡切片的制作、免疫组化染色

4.1取材

4.2脱水固定

4.3包埋

4.4切片

4.5烘烤

4.6 HE染色

4.7 SP法免疫组化染色

4.8用IPP测定Bcl-2与Bax表达情况

5.肝组织透射电镜标本制备

6.统计学处理

结果

1.转氨酶检测结果

2.MDA、SOD检测结果

3.Bax、Bcl-2IOD检测结果

4.肝组织透射电镜下结构的变化

讨 论

1.本研究中肝脏再注损伤模型的复制

2.氯胺酮后处理及其联合缺血后处理对肝再灌注损伤的作用

2.1本研究采用指标的意义

2.2氯氨酮后处理对再灌注损伤的作用

2.3氯氨酮后处理联合缺血后处理对再灌注损伤的作用

3.研究的局限性

结 论

参考文献

攻读硕士学位期间发表的学术论文

致 谢

附 录