淫羊藿次苷Ⅱ纳米脂质体的制备及其在大鼠体内药代动力学和组织分布研究

摘要

目的：
　　1、制备 ICSII纳米脂质体；
　　2、建立 LC-MS方法测定大鼠血浆及组织中 ICSII浓度；
　　3、明确 ICSII纳米脂质体在大鼠体内的药代动力学和组织分布行为。
　　方法：
　　1、采用 Sephadex LH-20-微柱离心-高效液相方法测定 ICSII纳米脂质体包封率。通过对离心次数、游离药物干扰试验进行考察，筛选ICSII纳米脂质体包封率测定的方法。ICSII纳米脂质体经 Sephadex LH-20微柱吸附后在相对离心力45 g，PBS离心洗脱7次的条件下可使纳米脂质体与游离药物分离。方法学考察表明专属性良好，在0.01-0.35 mg/mL范围内呈良好线性关系(R2>0.999)；重复性良好，日内精密度及日间精密度均 RSD不大于2.00％，游离药物回收率98.86%，游离药物对脂质体的测定几乎不干扰。采用薄膜分散-超声法制备 ICSII纳米脂质体，并对制备工艺进行单因素初步优化。
　　2、采用高效液相色谱-质谱联用(LC-MS)方法测定 ICSII纳米脂质体在大鼠血浆中 ICSII的浓度。血浆样品采用乙酸乙酯萃取，室温氮气吹干，甲醇复溶后进样，以淫羊藿次苷Ⅰ为内标，色谱条件为：Gemini-Nx3μ C18110A Phenomenex色谱柱(150×3.0 mm，3μm)，流动相为0.25%甲酸水和0.25%甲酸乙腈，流速0.5 mL/min，进行梯度洗脱。采用电喷雾离子源(ESI)，正离子模式，多反应离子监测(MRM)进行扫描，定量离子对为m/z515.2/313.2(ICSII)和m/z531.2/313.2(IS)。ICSII在大鼠血浆中的线性范围为：3.80-760.00 ng/mL，R2>0.990；日内、日间精密度的RSD均不大于8.39%，准确度在±6.91%之间；提取回收率在84.98%~98.55%之间， RSD不大于8.44%；长期稳定性(4周)RSD值不大于11.25%；反复冻融(3次)稳定性RSD值不大于5.19%；所建方法快速、灵敏、重复性好。12只 SD大鼠，随机分两组，分别尾静脉注射5 mg/kg的ICSII混悬液和纳米脂质体，LC-MS测定不同时间点血药浓度，采用 DAS3.2.8计算药代动力学参数。
　　3、组织分布实验首先在与血浆样品相同的处理方法及测定条件基础上，建立 LC-MS方法测定组织中 ICSII的方法，ICSII在大鼠组织中线性范围为：3.83-766.00 ng/mL，R2>0.99，日内、日间精密度 RSD不大于9.75%，准确度在±9.31%以内；提取回收率在84.95%-97.6%之间，RSD不大于10.05%。方法快速、灵敏、重复性好。72只SD大鼠，随机分两个大组(ICSII混悬液组，和ICSII纳米脂质体组)12个小组，分别尾静脉注射5 mg/kg的ICSII混悬液和纳米脂质体后，颈椎脱臼处死，取心、肝、脾、肺、肾，采用已建立LC-MS方法测定药物在组织中的浓度。DAS3.2.8计算各组织药动学参数。
　　结果：
　　1、脂质体最优制备工艺为 ICSII:磷脂:胆固醇=1:20:5(W:W:W)，甲醇：0.5 mL，氯仿：6 mL，水化体积：3 mL，超声时间：30 min。平均包封率为95.6%，透射电镜观察ICSII纳米脂质体，呈球形或近似球形，平均粒径86.7 nm，多分散指数(Polydispersity index, PDI)为0.272。
　　2、采用 DAS3.2.8软件计算大鼠尾静脉注射 ICSII纳米脂质体及 ICSII原型药物的药时曲线及主要药代动力学。结果t1/2Z：原型药物组1.81±0.67 h，纳米脂质体组3.25±1.478 h(p<0.05)，较原型药物t1/2Z明显延长。MRT(0-t)和 MRT(0-∞)分别为原型药物组0.45±0.39 h和0.49±0.48 h，纳米脂质体组为1.60±0.65 h(p<0.01)和2.22±1.03 h(p<0.01)，较原型药物组明显延长。AUMC(0-t)和AUMC(0-∞)原型药物组为575.14±135.47 h×h×ug/L和608.96±181.33 h×h×μg/L，纳米脂质体组1328.73±692.10 h×h×μg/L(p<0.05)和2059.45±1478.74 h×h×μg/L(p<0.05)，较原型药物组明显增大。
　　3、通过对主要脏器中 ICSII浓度测定，采用 DAS3.2.8计算分别计算纳米脂质体及原型药物组的参数。心 t1/2Z：原型药物组为0.80±0.30 h，纳米脂质体组为1.21±0.29 h(p<0.05)，较原型药物组明显延长。脾 MRT(0-∞)：原型药物组为0.34±0.31 h，纳米脂质体组为：1.35±1.09 h(p<0.05)，较原型药物组明显延长。肺MRT(0-∞)：原型药物组为0.87±0.44 h，纳米脂质体组为1.42±0.51 h(p<0.05)，较原型药物组明显延长。脾的一阶矩曲线下面积AUMC(0-t)和 AUMC(0-∞)分别为：原
　　型药物组为128.36±68.17 h×h×μg/L，纳米脂质体组357.22±258.46 h×h×μg/L(p<0.05)，较原型药物组明显增大。
　　结论：本课题制备了包封率大于90%，粒径小于100 nm，分散性良好的ICSII纳米脂质体。建立了快速、灵敏、可靠的测定ICSII在大鼠血浆和组织中浓度的方法。通过制备纳米脂质体，延长了ICSII在血中的消除相半衰期和平均滞留时间。延长了ICSII在大鼠心的半衰期，增加了脾、肺中平均滞留时间。血和脾中一阶矩曲线下面积较原型药物组大。

目录

声明

中英文缩略词表

前言

第一章 ICSⅡ 纳米脂质体包封率测定方法的建立及其制备工艺初步研究

1 主要仪器与材料

2 实验方法

3 单因素优化纳米脂质体制备工艺

4 ICSII纳米脂质体的表征

5 结果与讨论

6 讨论

第二章 ICSⅡ 纳米脂质体在大鼠体内的药代动力学研究

1 主要仪器与材料

2 实验方法

3 结果

4 讨论

第三章 ICSⅡ 纳米脂质体在大鼠体内的组织分布学研究

1 主要仪器与材料

2 实验方法

3 结果

4 讨论

结论

参考文献

综述:淫羊藿次苷Ⅱ研究进展

致谢

个人简历