慢性阻塞性肺疾病稳定期患者外周血CD8+T细胞自噬水平与数量的相关性研究

摘要

目的：通过检测COPD稳定期患者外周血中CD8+T细胞亚群分布，其自噬基因、自噬蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白的表达水平，探讨CD8+T细胞自噬水平与其数量的相关性，有助于明确COPD稳定期患者CD8+T细胞长期升高的原因，进一步明确COPD的发病机制。 方法：将研究对象分为COPD稳定期组(COPD)、吸烟肺功能正常组（SN）、不吸烟肺功能正常组（NSN）各30例，用流式细胞术检测外周血中CD8+T细胞总数，包括CD8+效应性T细胞和记忆性T细胞的比例及其凋亡情况。用流式细胞术分选出CD8+T细胞，运用实时定量PCR检测LC3、P62基因的表达水平；运用蛋白免疫印迹技术检测LC3Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白的表达水平。 结果： 1、流式细胞术检测CD8+T细胞数量及凋亡结果显示：①COPD组CD8+T细胞数（%）（32.33 ±4.23%）明显高于其他两组（p<0.05)；COPD组CD8+效应性T细胞数（25.63±8.57）、记忆性T细胞数（22.10±6.706）均高于其他两组（p<0.05)。SN组CD8+T细胞数、CD8+效应性T细胞数、记忆性T细胞数均高于NSN组（p<0.05）。②COPD组CD8+T细胞凋亡率（23.51±6.11%）低于其他两组（P<0.05），SN组低于NSN组（p<0.05）。2、三组LC3基因表达水平无显著性差异（p>0.05）；P62基因在COPD组表达高于其他两组（p<0.05），SN组高于NSN（p<0.05）。 3、自噬蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ在COPD组表达高于其他两组（p<0.05），SN组高于NSN组（p<0.05）；P62蛋白在COPD组表达高于其他两组（p<0.05），SN 组高于 NSN 组（p<0.05）。4、相关性分析：①、LC3Ⅱ/Ⅰ的表达水平分别与 CD8+T 细胞总数(r=0.572, p<0.05)、CD8+效应性 T 细胞(r=0.672,p<0.05)、CD8+记忆性T细胞(r=0.739,p<0.05)均存在正相关关系；LC3Ⅱ/Ⅰ的表达水平与CD8+T细胞凋亡率无明显相关性。②、P62的表达水平与CD8+T细胞总数、CD8+效应性T细胞、CD8+记忆性T细胞均存在正相关关系，p<0.05；P62的表达水 平与CD8+T细胞凋亡率无明显相关性。 5、回归分析：①CD8+T细胞总数、CD8+效应性T细胞数、CD8+记忆性 T 细胞数与 LC3Ⅱ/Ⅰ/GAPDH(?)、P62/GAPDH(?)均存在线性关联，具有统计学意义（P<0.001）。 结论 1、COPD稳定期患者外周血CD8+T细胞数量有显著增加，其中包括CD8+效应性T细胞和记忆性T细胞的比例增加，而CD8+T细胞凋亡率降低； 2、COPD稳定期患者外周血CD8+T细胞的自噬水平显著升高。3、COPD稳定期患者外周血CD8+T细胞的自噬蛋白表达水平与细胞数量之间存在正相关关系。提示细胞自噬有可能通过促进CD8+T细胞数量的增多，从而参与COPD稳定期的慢性气道炎症。

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