大鼠宫腔粘连模型的建立

摘要

第一章 大鼠宫腔粘连模型的建立 宫腔粘连（Intrauterine Adhension，IUA）和薄型子宫内膜（Thin Endometrium，TE）是女性不孕的常见原因。宫腔镜微创手术的应用、普及，可以使宫腔粘连患者的宫腔形态得到基本或完全的恢复。可是，虽然术后宫腔内放置屏障系统或生物制剂已被证实对宫腔粘连的修复及形态维持有一定作用，中重度宫腔粘连患者的术后内膜修复情况仍不乐观，且存在继发感染的隐患。特别是III-IV度IUA子宫内膜薄、术后复发率高，妊娠率低，生殖预后情况不乐观。只有找到行之有效促进子宫内膜修复的方法才能真正改善此类患者的生殖预后。然而因为各类药物给药方式复杂及伦理原因，急需找到可用的动物模型。本课题旨在为子宫内膜损伤的发病机制和治疗方法提供更多可选择途径，尝试构建薄型子宫内膜模型与大鼠宫腔粘连模型，并模拟宫内水状用药和凝胶状用药，观察不同给药方式本身对大鼠内膜恢复情况的影响。 研究目的：摸索并构建大鼠宫腔粘连与薄型子宫模型，并初步探索药物性状对治疗效果的影响。 1) 建立大鼠宫腔粘连模型，为内膜相关实验研究提供动物模型参考； 2) 摸索大鼠薄型子宫内膜模型的建立方法； 3) 摸索液体状药物在大鼠宫腔内的给药方式，为内膜相关实验提供给药方式参考； 4) 摸索凝胶状药物在大鼠宫腔内的给药方式，为内膜相关实验提供给药方式参考。 研究方法：摸索并构建大鼠宫腔粘连与薄型子宫模型。 1) 220-280g健康雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠，实验组用95%酒精灌入大鼠子宫内膜，造模组注入约0.5mL95%的酒精，对照组分别不作处理、注入生理盐水、注入凝胶介质，同时每组均存在自身对照。 2) 220-280g健康雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠，实验组用脂多糖溶液灌入大鼠子宫内膜，并在宫内放置脂多糖棉线，对照组分别不作处理、注入生理盐水、注入凝胶介质，同时每组均存在自身对照。 3) 在造模后两周处死大鼠，取自身对照及用 HE 染色检测内膜厚度变化情况。 研究结果： 1) 薄型子宫内膜模型实验组与对照组HE染色内膜厚度没有明显差异； 2) 宫腔粘连模型实验组与对照组 HE 染色内膜厚度有明显差异，差异具有统计学意义。其中生理盐水组与自身对照相比具有显著差异(P≤0.05)，凝胶介质组与自身对照相比具有极显著差异(P≤0.01)。 结论：用搔刮后置入手术棉线再注入脂多糖溶液以加重感染的三重损伤法能有效完成大鼠宫腔粘连模型的建模。 第二章 Nuf2基因在小鼠胚胎发育过程中的作用 近年来，不孕不育相关疾病在世界范围内的发病率约为 8%-15%，且发病率正逐年升高。在我国，有近千万对夫妇正在饱受不孕不育的困扰。生育力下降正成为威胁人类健康和繁衍的一项巨大挑战。1978年，英国科学家 Edwards 将实验室的研究成果与临床医学结合，获得了世界第一例体外受精-胚胎移植（IVF-ET）的成功。近四十年来，由这种技术及其衍生技术辅助出生的孩子人数超过 600 万，已经成为一个庞大的群体。但目前ART成功率只有30%左右，尤其是若以成熟卵母细胞计数，活婴出生率在 5%以下，效率非常低下。而由于技术方法及材料来源限制，目前对人类早期胚胎发育复杂机制的研究还不够透彻。因此，更加深入地了解人类早期胚胎发育机制至关重要。已有研究表明，Nuf2 与细胞分离时纺锤体的组装以及细胞有丝分裂有关。但在胚胎中还未见相应报道。 研究目的：探究Nuf2在小鼠胚胎发育过程中的作用及其机制。 研究方法：取6-8周ICR胚胎，注入Nuf2 Morpholino抑制Nuf2蛋白表达后，通过观察后续胚胎发育过程的表型，确定Nuf2基因在胚胎发育过程中是否起作用，为进一步探寻其作用机制作确定的表型铺垫。 研究结果：在抑制Nuf2蛋白表达后，小鼠胚胎体外发育过程明显抑制，囊胚率和4细胞/2细胞比率较对照组明显降低，差异具有统计学意义。 结论：Nuf2在小鼠早期胚胎发育过程中起到非常重要的作用。

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