吴茱萸碱联合吉西他滨对人舌鳞癌荷瘤裸鼠模型的抑制作用及其机制研究

摘要

背景和目的：传统手术及放化疗等治疗手段对舌癌患者带来的致残性和全身毒副反应等尚不能达到理想的治疗效果。本实验的目的在于研究中药吴茱萸碱联合西药吉西他滨对舌鳞癌裸鼠移植瘤生长的影响，初步探讨两药联合作用的机制，并分析用药的安全性。 方法：通过皮下接种Cal-27肿瘤细胞建立人舌鳞癌荷瘤裸鼠模型。建模成功后采用灌胃及腹腔注射法给予吴茱萸碱、吉西他滨单独及联合对荷瘤裸鼠进行药物干预。观察中药吴茱萸碱联合西药吉西他滨对Cal-27舌鳞癌荷瘤裸鼠一般状态的影响；监测裸鼠体质量、瘤体体积、进食量、进水量，及对外界刺激的应激反应变化；称量瘤体重量并计算抑瘤率；HE染色法观察移植瘤组织中肿瘤细胞形态变化；肉眼观察裸鼠心、肝、肺、脾、肾脏组织的肿瘤转移情况；HE染色法观察各脏器形态变化；透射电镜下观察移植瘤组织中肿瘤细胞超微结构改变；Western blot定量分析移植瘤组织中NF-κB/p65、Ik-βα、Bax、Bcl-2以及Bcl-xl的蛋白表达，并计算Bcl-2/Bax、Bcl-xl/Bax 比值；免疫组化法定性分析移植瘤组织中NF-κB/p65、Ik-βα、Bax以及Bcl-2的蛋白表达。 结果：联合组的瘤体生长速度显著慢于模型对照组、吴茱萸碱组、吉西他滨组。联合组瘤体质量明显比模型对照组、吴茱萸碱组、吉西他滨组要小。四组中各脏器未发现可疑转移灶。联合组病理性核分裂像的数目明显少于模型对照组、吴茱萸碱组及吉西他滨组。模型对照组肿瘤细胞体积大，核膜清晰、完整，呈现恶性肿瘤特征，药物干预组的肿瘤细胞体积减小，染色质发生凝集、边聚，出现凋亡形态改变，联合组凋亡表现尤为典型。联合给药组较模型对照组及单药组其裸鼠进食量、进水量及应激反应下降要慢。各组裸小鼠的心、肝、肺、脾、肾组织结构清晰，未见明显病理性改变。药物干预组都可不同程度的降低Bcl-2蛋白的表达，升高Bax蛋白的表达，表现为Bcl-2/Bax、Bcl-xl/Bax的比值减小，其中联合组凋亡率减小最为显著。与模型对照组相比，吴茱萸碱组和联合组均能显著抑制NF-κB/p65的表达，促进Ik-βα的表达。 结论：吴茱萸碱及吉西他滨均具有抗舌鳞状细胞癌生长作用，联合应用时具有协同抑制作用，其作用机制可能是吴茱萸碱通过抑制舌鳞癌组织中NF-κB信号通路的激活、抑制Bcl-2/Bcl-xl的表达，促进Bax的表达，从而降低Bcl-2/Bax、Bcl-xl/Bax 比值，最终增强吉西他滨对舌鳞癌的促凋亡作用。此外，在实验期间，两者联合用药未对实验动物产生明显的毒副作用，说明用药方法及剂量均在安全范围内。

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