声明
第一章 研究背景
1.1 口腔癌前病变
1.2 永生化人口腔黏膜上皮细胞的研究现状
1.3 细胞凋亡过程中核转录因子的作用
1.4 核转录因子对三个凋亡通路的影响
1.5 选题依据和研究思路
第二章 原代人口腔黏膜上皮细胞的分离与培养
2.1 实验材料和仪器
2.1.1 实验设备和试剂
2.1.2 自制溶液
2.2 实验方法
2.2.1 标本来源
2.2.2 标本处理
2.2.3 细胞培养及冻存
2.3 实验结果
2.4 小结与讨论
第三章 过表达hTERT人口腔黏膜上皮细胞的获得与鉴定
3.1 实验材料及仪器
3.1.1 实验设备与试剂
3.1.2 自制溶液
3.2 慢病毒载体的包装
3.2.1 工具细胞的准备
3.2.2 包装plv-hTERT慢病毒颗粒
3.2.3 验证慢病毒颗粒包装是否成功
3.3.1 建立慢病毒介导的过表达hTERT人口腔黏膜上皮细胞系及筛选
3.3.2 细胞总RNA的提取及反转录
3.3.3 RT-qPCR检测hTERT基因表达量
3.4 实验结果
3.4.1 plv-hTERT慢病毒颗粒的包装结果
3.4.2 慢病毒介导的过表达hTERT人口腔黏膜上皮细胞系的筛选结果
3.4.3 hTERT基因的表达量
3.5 讨论与小结
第四章 探究核转录因子对三种细胞凋亡能力的影响
4.1 实验材料及仪器
4.1.1 实验设备与试剂
4.1.2 自制溶液
4.2 三种细胞核转录因子的表达量
4.2.1 细胞的准备
4.2.2 三种细胞细胞质及细胞核蛋白的提取
4.2.3 Western Blot检测三种细胞细胞质中核转录因子表达量
4.2.4 Western Blot检测三种细胞中核转录因子的入核量
4.3 实验结果
4.3.1 三种细胞细胞质中核转录因子表达量
4.3.2 三种细胞中核转录因子的入核量
4.4 讨论与小结
第五章 验证过表达hTERT人口腔黏膜上皮细胞中三个凋亡通路是否被激活或抑制
5.1 实验材料及仪器
5.1.1 实验设备与试剂
5.1.2 自制溶液
5.2 流式细胞术验证内质网通路
5.2.1 细胞的培养与染色
5.2.2 流式细胞仪检测荧光强度
5.3 Western Blot验证线粒体通路
5.4 实时荧光定量PCR验证死亡受体凋亡通路
5.5 实验结果
5.5.1 内质网通路的验证结果
5.5.2 线粒体通路的验证结果
5.5.3 死亡受体凋亡通路的验证结果
5.6 讨论与小结
第六章 全文总结与展望
6.1 全文总结
6.2 研究展望
参考文献
在学期间的研究成果
致谢
附录-病例
