雌激素受体ERα亚细胞定位及其与细胞生长的相关性

摘要

雌激素受体(estrogen receptor，ER)是核受体超家族(nucleus receptor，NR)成员之一。作为一种激素受体，ER能够被其配体雌激素中的主要成分雌二醇(steroid hormone 17β-estradiol，E2)激活。ER广泛地分布在雌性或雄性生殖系统、乳腺、中枢神经系统的部分区域里。同时，ER还参与细胞增殖、分化、凋亡等各种重要的生理调控过程。 ER可以分成ERα和ERβ两个亚型，它们都由4个不同的功能域组成，每个功能域都发挥不同的作用。这4个功能域分别是：转录激活区(A/B)、配体结合区(LBD)、铰链区(Hinge)和DNA结合区(DBD)。本文中，我们通过构建ERα的不同缺失突变体(ERΔLBD、ERADBD和ER△Hinge)来研究不同功能域在细胞增殖、亚细胞定位和E2刺激对ERa亚细胞定位的影响。结果表明，ERα呈核多浆少的分布、ERΔLBD为核定位、ER△DBD为核多浆少分布、ER△Hinge主要分布在浆，核中有很少量。进一步分析表明，E2诱导的ERα入核是入核序列(NLS)依赖性。此外，我们还发现，ERα能够增强293T细胞增殖，且这种促增殖效应依赖于ERα在细胞核与胞浆的正常转运。 视黄素X受体(retinoid X receptor,RXR)属于类固醇/甲状腺激素受体超家族成员，其配体视黄素(retinoids)是天然的或人T合成的维生素A衍生物。视黄素通过RXRs的介导在细胞生长、分化和凋亡过程中发挥重要的作用。 RXRα能够与ERα结合形成异源二聚体，但RXRα在协助ERα转运过程中的作用未见报导。我们的研究表明，RXRα能够协助突变体ERΔDBD和ER△Hinge出核，并且当E2处理细胞后，出核的ER△DBD又重新回到核中，而出核的ER△Hinge不受影响。结果提示，ERα不同功能域在与RXRα、E2作用时发挥不同的功能。 总之，通过研究，我们确定了ERα不同功能域在其亚细胞定位、促细胞增殖中的作用，并且发现RXRα能够协助ER△DBD和ER△Hinge出核。这为我们进一步研究ERα和E2的作用机理以及更有效地防治乳腺癌提供了一些研究思路。

目录

声明

摘要

前言

1雌激素受体ER

1.1 ER的结构

1.2 ER与配体

1.3选择性ER调节因子与肿瘤治疗

1.4 ER信号调控的机制

1.5 ER分子结构的作用机制

1.6 ER的转运

2视黄素X受体RXR

2.1 RXR的分子结构

2.2 RXR的功能研究

3本文研究的目的和科学意义

材料和方法

1、材料

2、实验方法

2.1细胞培养

2.2药物处理

2.3瞬时转染(磷酸钙沉淀法)

2.4质粒构建

2.5蛋白提取与Westem Blots

2.6免疫荧光染色和观察

2.7 BrdU检测

结果与分析

1.ERα及其缺失突变体表达载体的构建

2.ERα及其缺失突变体在细胞中的定位

3.配体对ERα及其缺失突变体的影响

4.RXR对ER及其突变体在细胞中定位的影响

5.E2对ERα及其缺失突变体和RXRα共定位的影响

6.ERα及其缺失突变体对细胞增殖的影响

四讨论

参考文献

致谢