节段定位斜扳法治疗腰椎间盘突出症血清蛋白组学水平变化及临床疗效研究

摘要

目的: 1、运用双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis，2-DE)和质谱分析（Mass Spectrometry，MS）筛选并鉴定出腰椎间盘突出症(Lumbar DiscHerniation，LDH)患者接受节段定位斜扳法治疗前及治疗2个疗程后的血清差异蛋白，并对差异表达蛋白点进行生物信息学分析，然后利用酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)对筛选并鉴定出的差异蛋白在个体血清样品中进行表达验证，为寻找手法治疗LDH的机制及可能与LDH的发生和发展相关的蛋白质提供新线索。 2、观察节段定位斜扳法治疗腰椎间盘突出症的临床疗效，并探讨节段定位斜扳法治疗腰椎间盘突出症的作用机理和镇痛原理，为临床治疗提供理论依据。 方法: 1、研究对象:贵阳中医学院第一附属医院2011年12月～2013年05月推拿门诊及针灸推拿科病房25名（20岁～50岁）气滞血瘀型LDH（L4/L5或L5/S1，后侧型突出）患者。 2、研究步骤:①分别留取研究对象接受节段定位斜扳法治疗前及治疗2个疗程后的血液样品，分离血清，提取血清蛋白，样品经过2-DE后，再结合MALDI-TOF-MS分析，所得到的结果用MASCOT软件进行数据库检索，鉴定出血清差异蛋白，最后采用ELISA对血清蛋白进行差异表达验证。②分别在节段定位斜扳法治疗前和治疗2个疗程后对LDH患者的功能状况进行评定，评定标准参照Oswestry功能障碍指数(Oswestry Disability Index，ODI)评分表，并采用SPSS17.0软件包进行数据统计分析，计量资料采用均数±标准差表示，正态性分布采用单样本K-S检验，差异性比较采用配对t检验（P＜0.05）。 结果: 1、对LDH患者接受节段定位斜扳法治疗前后的血清样品应用双向凝胶电泳进行2-DE图谱对比及分析，发现了6个显著差异表达蛋白点，均为表达水平降低，证明LDH患者经过节段定位斜扳法治疗后其血清蛋白表达量发生了明显变化。对其中3个差异蛋白点，运用MALDI-TOF/TOF质谱仪测定出肽段质量指纹图谱(Peptide mass fingerprinting，PMF)，并用蛋白质鉴定检索软件进行数据库检索，鉴定各肽段对应的蛋白，结果2个蛋白点被成功鉴定，另外1个蛋白点由于没有得到令人满意的PMF或检索数据库时不能得到可信度高于最低标准的结果而未能鉴定。鉴定出的蛋白质有:α1-酸性糖蛋白(Alpha1-Acid Glycoprotein，AGP)和Ig alpha-1 chain C region。最后用ELISA验证差异蛋白α1-酸性糖蛋白在个体血清样品中的表达情况，结果证实了运用2-DE结合MADLI-TOF-MS并通过数据库检索所得出的结论:血清α1-酸性糖蛋白治疗后组表达水平低于治疗前组。 2、Oswestry功能障碍指数(ODI)评定:LDH患者接受节段定位斜扳法治疗前后的ODI总分和各个项目评分结果，经单样本K-S检验，其数据均服从正态性分布;对LDH患者治疗前后的ODI各项目评分和总评分进行比较，采用配对t检验，两者间差异均有显著性意义（P＜0.05），治疗后组优于治疗前组。 结论: 1、双向凝胶电泳结合质谱分析是研究节段定位斜扳法治疗LDH血清蛋白组学水平变化的较好平台和工具。鉴定出的差异表达蛋白——α1-酸性糖蛋白(Alpha1-Acid Glycoprotein，AGP)与腰椎间盘突出症的发病机制相关，表明可以从蛋白质水平来探讨腰椎间盘突出症发病机制可能涉及到的蛋白因子，也为寻找腰椎间盘突出症发生和发展的机理提供了新的线索。 2、节段定位斜扳法可改善LDH患者的功能状况，提高其Oswestry功能障碍指数(ODI)评分的优良率，对LDH患者有较为明确的临床疗效。

目录

声明

摘要

1 一般资料与材料

1．1 一般资料

1．1．1 研究对象的来源

1．1．2 研究对象参考标准

1．2 材料

2 方法与结果

2．1 治疗方法

2．2 血清蛋白组学水平变化研究方法

2．2．1 研究技术路线

2．2．2 研究步骤

2．3 临床疗效研究方法

2．3．1 临床疗效评价标准

2．3．2 临床疗效统计学方法

2．4 结果

2．4．1 血清蛋白组学水平变化研究结果

2．4．2 临床疗效研究结果

3 结论与讨论

3．1 结论

3．2 讨论

3．2．1 祖国医学对腰椎间盘突出症的认识

3．2．2 现代医学对腰椎间盘突出症的认识

3．2．3 节段定位斜扳法治疗LDH作用机理的讨论

3．2．4 研究对象及标本的选择

3．2．5 血清蛋白组学研究方法的讨论

3．2．6 血清差异蛋白的讨论

3．2．7 临床疗效评价标准的选择

3．2．8 对ODI评分统计结果的分析

3．2．9 本研究的创新与问题

全文总结与展望

参考文献

附录一 缩略词表

附录二 综述 蛋白质组学技术在腰椎间盘突出症研究中的应用与展望

附录三 病例收集资料

致谢

附录五 个人简介