活体高通量筛选抑制斑马鱼中性粒细胞迁移的中药

摘要

目的:建立由绿色荧光蛋白(EGFP)标记中性粒细胞和中性粒细胞迁移、聚集的转基因斑马鱼模型（MPO-EGFP）[1]，应用此模型筛选出能够抑制中性粒细胞向急性损伤部位迁移、聚集的中药。
　　方法:应用分子克隆等技术建立由绿色荧光蛋白标记中性粒细胞的转基因斑马鱼(MPO-EGFP)。用无菌手术刀切割斑马鱼尾部的方法，制造急性炎症疾病模型，诱导中性粒细胞向急性损伤部位迁移，并在荧光显微镜下观察损伤部位并对迁移的中性粒细胞数量进行计数。以此急性炎症疾病模型为基础，筛选能够抑制中性粒细胞迁移、聚集的中药。
　　结果:在斑马鱼急性炎症疾病模型的基础上，对302种中药的抑制作用进行筛选，结果表明，3＃、28＃、35＃三种乙醇提取药物能够明显抑制转基因斑马鱼急性损伤炎症反应后中性粒细胞迁移，且抑制作用呈一定程度的药物剂量依赖性，此外，三种药物乙醇提取物之间存在中性粒细胞抑制的协同作用，表现为3＃药物的乙醇提取物同其他两种药物乙醇提取物能协同抑制中性粒细胞向损伤部位的迁移、聚集。
　　结论:1、运用分子克隆等分子技术成功构建了绿色荧光蛋白标记斑马鱼中性粒细胞的转基因斑马鱼(MPO-EGFP);
　　2、用无菌手术刀切割MPO-EGFP斑马鱼尾部的方法，成功构建了诱导中性粒细胞向急性损伤部位迁移的急性炎症疾病模型;
　　3、成功筛选出3种抑制中性粒细胞向急性损伤部位迁移的中药;
　　4、3种中药对MPO-EGFP斑马鱼中性粒细胞向损伤部位迁移的抑制作用存在剂量依赖性;
　　5、3＃中药应用剂量为50mg/L时，同28＃及35＃中药在应用剂量为50mg/L时具有协同抑制MPO-EGFP中性粒细胞向损伤部位迁移、聚集的作用;