闽南地区五个品种茶树病斑周围可培养真菌的多样性和抗茶叶真菌病害的活性筛选

摘要

茶是世界上最重要的三大饮料之一，它是由茶树的嫩叶制作而得的，福建以乌龙茶而出名。茶树在生长中受到各种病害的侵染，其中叶片的真菌病害的危害最严重，造成的损失最大。针对茶叶的生物农药在生产中有着广泛的应用前景。深海真菌是一个重要的资源库，其中含有很多未被人认知和利用的资源；植物内生真菌是医学、农业和工业中新型天然活性物质的重要来源，从深海真菌和茶叶内生真菌中筛选抗茶叶真菌病害的活性物质，为生产和社会服务，有着重要的意义。本研究从茶园采取茶树病叶样品，从病斑周围分离真菌，对真菌类群的多样性进行研究，验证茶叶的致病真菌，对深海真菌和茶叶内生真菌抑制茶叶致病菌的活性进行筛选，为茶叶生物农药的研制奠定基础。
　　 本研究从福建厦门无公害茶园采取了本山、丹桂、黄旦、毛蟹、铁观音5个茶树品种的112个病叶样品，共从中分离出307株真菌。用ITS rDNA(Internal Transcribed Spacer of ribosomal DNA)序列分析的方法对所有真菌进行了鉴定，并建立了系统进化树。结果显示90.9％的真菌是子囊菌，分属于子囊菌的12个目；其余9.1%的真菌分属于担子菌的5个目。经致病性验证实验分析，子囊菌中的某些类群，如Pestalotiopsis theae， Pestalotiopsis sp.， Colletotrichumgloeosporioides(有性型Glomerella cingulata), Alternaria sp., Phoma sp., Neofusicoccum sp.是茶树叶片的致病真菌。对分得的拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis)真菌中的36株进行了形态学、ITS序列和致病性方面的比较和鉴定。从茶树5个品种中分离到的真菌的种类和数目差异很大，这种差异显示真菌多样性和宿主密切相关。值得一提的，有19个种系型的ITS序列同源性在98%及以下，这些可能是潜在的新菌类群，用部分大亚基(large subunit， LSU)序列鉴定的方法进一步明确了这些真菌的分类地位。以潜在真菌新种的DNA为模板，有2株用PKS引物扩增出了相应的PKS序列；用CCK8法检测出4株茶叶真菌潜在新种具有明显的细胞毒活性；从茶叶内生真菌和深海真菌中共筛选出抗茶叶致病真菌的活性菌18株，并选取具有细胞毒活性和抑制致病真菌活性的茶叶真菌潜在新种LH40菌株进行了化合物的初步分离，获得主代谢产物弯孢霉菌素。