骨髓间充质干细胞复合海螵蛸支架与玻璃酸钠联合治疗兔桡骨缺损与BMP--2mRNA的表达

摘要

目的:在前期动物实验研究的基础上，以骨髓间充质干细胞、海螵蛸复合支架与玻璃酸钠作为组织工程骨，治疗兔桡骨大段骨缺损，从基因水平探讨骨缺损愈合中骨形态发生蛋白(BMP)-2mRNA的表达。 方法:选取80只健康成年新西兰大白兔随机分为5组，每组16只。制作成右侧桡骨干1.0cm完全骨缺损（保留骨膜）的动物模型。A组植入骨髓间充质干细胞、海螵蛸复合支架与玻璃酸钠;B组植入骨髓间充质干细胞、海螵蛸复合支架;C组植入海螵蛸与玻璃酸钠;D组植入海螵蛸;E组单纯造骨缺损模型，作为空白对照组。分别于移植后2、4、8和12周时进行大体组织观察、X线观察及评分，采用实时荧光定量(RT-PCR)法检测新生骨痂中BMP-2mRNA的表达情况，以B组、C组和D组作为对照组来比较分析各组植入物修复骨缺损的能力。 结果:1）A组12周时可完整修复骨缺损，各时段X线评分、BMP-2mRNA的表达均优于其他各组，与B组差异有显著性意义P(＜0.05），与C、D及E组差异具有极显著性P(＜0.01)。 2)各时段X线评分、BMP-2mRNA的表达量比较，B组与C、D组差异有显著性意义P(＜0.05）;与E组差异具有极显著性P(＜0.01)。 3)各时段X线评分、BMP-2mRNA的表达量比较，C、D组与E组差异有显著性意义P(＜0.05）; C、D组无明显差异性P(＞0.05）。 结论: 1，骨髓间充质干细胞可被诱导成骨，并能黏附于海螵蛸支架。 2，海螵蛸可作为骨支架材料并具有诱导成骨能力，体内降解速度较快。 3，玻璃酸钠与骨髓间充质干细胞具有较好的相容性，具有促进骨髓间充质干细胞黏附、增殖及分化成骨作用。 4，骨髓间充质干细胞、海螵蛸复合支架与玻璃酸钠具有较好的成骨能力，可作为组织工程骨，成为修复骨缺损的一种移植替代材料。

目录

声明

摘要

引言

1．实验材料

2．试验方法

2．1 兔骨髓间充质干细胞的体外分离与培养

2．2 海螵蛸支架的制备及检测

2．3 制备BMSCs-海螵蛸复合生物支架

2．4 BMSCs-海螵蛸复合生物支架与玻璃酸钠的体外培养观察

3．实验动物模型制作

4．观察指标

4．1 大体组织观察

4．2 影像学观察

4．3 骨缺损处BMP-2提取与表达

5．目的基因(BMP-2mRNA)提取实验过程

5．1 Real Time PCR检测目的基因(BMP-2mRNA)引物设计

5．2 提取样本总RNA

5．3 RNA电泳

5．4 RNA消化

5．5 反转录

5．6 RealTimePCR

6．统计学方法

7．结果

7．1 一般情况

7．2 大体组织观察

7．3 X光检查

7．4 各时间点影响X线肉眼观察评分

7．5 RealTimePCR检测结果

8．讨论

全文总结与展望

参考文献

附录一 缩略语表

附录二 综述 中西医对治疗骨缺损中BMP-2mRNA表达的研究进展

附录三 图片

致谢

简历