轮状病毒致乳鼠感染后IFN-γ/IL-17水平及肠道外损伤的研究

摘要

目的:建立BALB/c乳鼠肠道感染轮状病毒(Rotavirus,RV)的动物模型，检测血Th1细胞因子(IFN-γ）和Th17细胞因子（IL-17）的水平，动态比较两细胞因子在不同时间点变化的差异性，进一步探讨RV感染后机体的细胞免疫过程及相关细胞因子的关系，深入了解RV感染的免疫病理特点，为临床防治RV感染及肠道外损伤寻找新的办法。
　　方法:以恒河猴胚肾细胞（MA-104）培养猴RV SA-11株，扩增，组织细胞半数感染量（TCID50）法测定病毒滴度，分装，-80℃冰箱保存备用。实验动物选用清洁级BALB/c乳鼠60只，日龄3-5日，雌雄各半，随机分为两组，每组30只，即实验组（RV感染模型组）:胃内灌入100ul（1×10-4）TCD50感染性滴度的SA-11株RV；空白对照组：胃内灌入100ul NS。病毒接种后，各组动物隔离饲养。接种当天以第0天计，接种后每天观察乳鼠的活动情况、有无皮肤脱水、肛门红肿、腹部鼓胀、体型、饮食情况及大便变化情况等，收集大便经胶体金法检测RV抗原。分别在接种后的第3天和第8天（每组各15只），活体摘除眼球取血各约0.5ml，血标本4000转/分钟离心20分钟留取血清（每个标本血清约50-100ul），经酶联免疫分析（ELISA）检测细胞因子IFN-γ和IL-17水平。处死乳鼠，留取肝脏、心脏等放置福尔马林内固定，苏木精－伊红（HE）染色光镜下观察形态学改变。结果:1、RV SA-11株在MA-104细胞内增殖良好，感染后24h即可出现病变，72h病变可达到(+++～++++)，组织细胞半数感染量法滴定所收集的病毒液，滴度TCID50为10-4。2、实验组乳鼠表现为食欲不振，活动减少，皮肤干燥、嗜睡、对刺激反应差、腹胀、腹泻症状（大便软、稀薄样便）等，第3～4天达到顶峰，至第8天精神状况好转。对照组乳鼠一直保持正常情形，皮肤弹性可，对刺激反应灵敏，食欲正常，精神活跃，大便正常。3、感染后第3天实验组IFN-γ水平明显高于对照组（P﹤0.01），第8天时水平与正常对照组比较未见显著差异（P﹥0.05）；感染后第3天实验组IL-17水平与正常对照组比较未见显著差异（P﹥0.05），第8天时水平明显高于对照组（P﹤0.05）。4、光镜下实验组乳鼠第3天大部分肝细胞肿胀，中、重度空泡变性，灶状LC浸润；心肌细胞浊肿，心肌间质水肿，心内膜、心肌层LC浸润，第8天时个别肝脏细胞稍肿胀，轻度空泡变性，心肌细胞大致正常。对照组肝脏及心脏病理未见明显改变。
　　结论:BALB/c乳鼠感染RV动物模型建立成功。乳鼠感染RV尤其在早期以IFN-γ表达为主，且伴有不同程度的肠外脏器损害，但总体上程度轻。而后期IL-17应答占优势，说明IL-17可能在RV的控制上起一定作用，且对肠外脏器的损害有一定修复作用。为外源性IL-17预防、治疗RV感染提供依据。

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中文摘要

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引言

材 料 和 方 法

一、实验材料

二、实验方法

三 统计学分析

结果

1. RV SA11株的细胞培养、抗原检测

2. 病毒滴度测定

3 乳鼠的表现

4.乳鼠大便RV抗原检测

5.乳鼠血清中IFN-γ，IL-17 ELISA检测

6.组织病理改变

讨论

1、RV的快速细胞培养和检测的意义

2、实验小鼠的选择及感染RV后细胞因子变化特点和意义

3 .乳鼠感染RV后肝脏及心脏的病理特点

结论

今后工作改进要点

参考文献

致谢

附录A英文缩写及中英文对照

附录B研究生期间发表和待发的文章

附录C 综述: 轮状病毒感染CD4+T细胞相关细胞因子研究新进展