植物内生真菌和稀有放线菌次级代谢产物的研究

摘要

微生物次生代谢产物是药物的重要来源。近年来，新的微生物次生代谢产物的发现多数来自特异生境微生物和稀有微生物菌源的应用，如植物内生真菌、海洋微生物、土壤稀有放线菌等。这些微生物资源由于其生境特异性以及种属特异性，能够产生许多具有新颖化学结构和独特生物活性的次级代谢产物，为新药创制提供重要的先导化合物。
　　本论文对2株马尾松内生真菌拟茎点霉菌Phomopsis sp.F00164和小丛壳菌Glomerella sp.F00244以及1株土壤稀有放线马杜拉菌Actinomadura sp.x11-7的次级代谢产物进行了研究，共分离鉴定25了个化合物，其中14个为新化合物。
　　从Phomopsis sp.F00164菌株的固体PDA培养基发酵粗提物中共分离鉴定了9个化合物，包括alternariol(F-4)，2个alternariol衍生物:F-2、F-3;4个nonenolides类化合物:F-1、F-35、F-39、F-41;2个phthalide衍生物:F-14、F-30。其中F-1、F-30、F-35、F-39和F-41为新化合物。
　　从Glomerella sp.F00244菌株的固体PDA培养基发酵粗提物中共分离鉴定了6个化合物，包括2个lanostane型三萜:H-3、H-8;1个cerevisterol衍生物(H-14)，3个ergosterol类化合物:ergosterol(H-1)，ergosterol peroxide(H-29)及其D环衍生物(H-17)。其中H-3、H-8和H-17为新化合物。
　　从Actinomadura sp.x11-7菌株的固体YMG培养基发酵粗提物中共分离鉴定了10个化合物，包括2个pimarane型二萜:Eleven-1、Eleven-3;2个吲哚二聚体衍生物:Eleven-5、Eleven-6;2个糖苷化合物:Eleven-14、Eleven-17;1个hydroxylactone类化合物:Eleven-19;genistein(Eleven-4);N-acetyltyramine(Eleven-28)和cybullol(Eleven-30)。其中Eleven-1、Eleven-3、Eleven-5、Eleven-6、Eleven-14和Eleven-19为新化合物。
　　对上述化合物的抗肿瘤活性和抗菌活性进行了初步测定。检测结果显示，Eleven-10对人宫颈癌Hela、人肝癌HepG2细胞株的IC50分别为11.59、4.70μg/mL; Eleven-4对Hela、HepG2细胞株的IC50分别为54.49、6.84μg/mL。其他化合物在浓度为10μg/mL时均未表现出明显的细胞毒活性。所有化合物均未表现出明显抗菌活性。
　　本论文的研究结果表明，植物内生菌和植物根际稀有放线菌中蕴藏着丰富的次级代谢产物，是寻找药物先导化合物的重要资源。

目录

声明

常用英文缩写词

摘要

第一章 前言

1．1 植物内生菌——潜在的天然药物新来源

1．1．1 植物内生菌的研究概况

1．1．2 植物内生真菌活性物质的研究概况

1．2 稀有放线菌——重要的天然产物来源

1．2．1 土壤稀有放线菌活性代谢产物的研究

1．2．2 海洋稀有放线菌活性代谢产物的研究

1．2．3 其他生境中的稀有放线菌活性代谢产物的研究

1．3 本论文的研究目的、内容和意义

第二章 材料与方法

2．1 材料

2．1．1 研究对象

2．1．2 菌种鉴定试剂

2．1．3 培养基

2．1．4 拮抗测定指示菌

2．1．5 肿瘤细胞株

2．1．6 抗肿瘤测定试剂

2．1．7 TLC显色剂

2．1．8 主要试剂与耗材

2．1．9 主要仪器

2．2 方法

2．2．1 菌种鉴定

2．2．2 抗菌活性测定

2．2．3 抗肿瘤活性测定

2．2．4 天然产物分离纯化

2．2．5 化合物的结构鉴定

第三章 结果与分析

3．1 马尾松内生菌拟茎点霉Phomopsis sp：F00164次级代谢产物的研究

3．1．1 F00164的菌株鉴定

3．1．2 固体发酵及发酵产物的提取

3．1．3 发酵产物的分离纯化

3．1．4 化合物的结构解析

3．1．5 化合物的生物活性检测

3．2 马尾松内生真菌小丛壳菌Glomerella sp．F00244次级代谢产物的研究

3．2．1 F00244菌株的鉴定

3．2．2 固体发酵及发酵产物的提取

3．2．3 发酵产物的分离纯化

3．2．4 化合物的结构解析

3．2．5 化合物的生物活性检测

3．3 放线马杜拉菌Actinomadura sp．x11-7次级代谢产物的研究

3．3．1 活性菌株的筛选

3．3．2 固体发酵及发酵产物的提取

3．3．3 发酵产物的分离纯化

3．3．4 化合物的结构解析

3．3．5 化合物的生物活性检测

第四章 结论、讨论与展望

4．1 结论与讨论

4．1．1 两株马尾松内生真菌次级代谢产物研究

4．1．2 土壤稀有放线菌的次级代谢产物研究

4．2 展望

附录

参考文献

致谢