依达拉奉、异丙酚联合预处理对乳鼠离体脑皮质细胞缺血再灌注损伤保护作用的研究

摘要

目的:
　　1、探讨依达拉奉、异丙酚联合预处理对乳鼠离体脑皮质细胞缺血再灌注损伤保护作用及可能机制;
　　2、比较上述两种药物预处理不同时间窗脑保护效应。
　　方法:
　　1、原代培养乳鼠脑皮质神经细胞:取出生24h以内的新生SD乳鼠的脑皮质细胞，体外培养至48小时用阿糖胞苷培养基换液一次，抑制神经胶质细胞及纤维细胞生长，以后每2天培养基半量换液，体外培养至第7天，随机分为六组，A组（正常对照组）、B组（谷氨酸损伤组）、C组（24小时药物联合预处理对照组）、D组（24小时药物联合预处理实验组）、E组（2小时药物联合预处理实验组）、F组（即刻药物联合预处理实验组）。
　　2、药物预处理:SD乳鼠脑皮质细胞体外至第7天，除A组和B组外，其他组分别于谷氨酸损伤前24小时、2小时、即刻用含3mg/L异丙酚及100umol/L依达拉奉的培养基联合预处理原代培养的神经细胞。
　　3、除A组和C组外，其他组均加入200umol/L谷氨酸无血清培养基损伤0.5h后，换正常培养液继续培养24h后观察。
　　4、HE染色倒置相差显微镜下观察神经细胞形态变化;通过MTT（神经细胞存活率）、LDH（乳酸脱氢酶漏出率）、ATP（神经细胞ATP酶活性）观察神经细胞成活率和细胞损伤情况;通过SOD（超氧化物歧化酶活力）、MDA（丙二醛含量）观察神经细胞抗氧化和氧化水平;流式细胞仪检测神经细胞凋亡情况;通过透射电镜观察神经细胞超微结构细胞器变化。
　　结果:
　　MTT、SOD、Na+-K+ATP:与A组相比较，B组显著下降（P＜0.01）、C组有所升高，但差异没有统计学意义;与B组相比较，D、E组均升高，D组最高（P＜0.01），F组没有统计学意义。MDA、LDH、神经细胞凋亡率:与A组相比较，B组明显增加（P＜0.05）、C组有所下降，但差异没有统计学意义;与B组相比较，D、E组均下降，以D组最低（P＜0.01），而F组没有统计学意义。HE染色后倒置相差显微镜下细胞形态学变化:A组和C组细胞形态基本正常，胞体饱满较大且轴突较清晰，有明显的细胞核，胞质较透亮且折光性强有明显的立体感。B组神经细胞明显损伤，细胞胞体明显变小，突起皱缩减少甚至消失、折光性减弱，细胞核破碎或细胞核固缩偏于细胞一侧，染色质固缩、边集，甚至形成核碎片等细胞凋亡的特征。D、E、F组细胞形态损伤明显减轻凋亡细胞减少。透射电镜下细胞超微结构的改变:A组和C组细胞形态基本正常。B组染色质溶解、边聚，核膜出现溶解、断裂，细胞膜破裂，胞浆内细胞器数量明显减少，线粒体出现严重肿胀、嵴消失、呈空泡样或固缩，粗面内质网严重扩张。D、E、F组细胞形态接近正常，较B组细胞损伤明显减轻。
　　结论:
　　依达拉奉、异丙酚联合预处理对乳鼠离体脑皮质细胞缺血再灌注损伤有明显协同保护作用;以24小时作为时间窗进行药物联合预处理，脑保护作用最明显。

目录

摘要

前言

1 材料与方法

1．1 实验材料

1．2 实验方法

1．3 指标检测及方法

1．4 统计学处理

2 结果

2．1 大脑皮质神经细胞鉴定

2．2 神经细胞存活率

2．3 神经细胞凋亡率

2．4 超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量测定

2．5 LDH漏出率

2．6 Na+K+-ATP酶测定

2．7 细胞形态学变化

2．8 细胞器变化

3．讨论

参考文献

致谢

缩略词表

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综述