一种新的维甲酸受体特异性激动剂的发现与功能研究

摘要

维甲酸类化合物对细胞的增殖与分化具有重要的调节作用，主要通过激活维甲酸受体（RARs，RARα，β，γ）或维甲类X受体（RXRs，RXRα，β，γ）发挥作用。这些小分子配体与受体结合后，维甲酸受体与维甲类X受体就会以异源二聚体的形式募集辅因子从而调控下游靶基因。维甲酸受体配体所具有的减缓或阻抑细胞增殖的作用已经广泛应用于多种癌症的治疗中，例如急性早幼粒白血病等。但是过于强烈的副作用会限制维甲酸类维甲酸受体配体的临床应用，而且维甲酸的临床使用还受到细胞抗药性的影响。因此，改变针对维甲酸受体配体的药物研发策略，研制不同于维甲酸类化合物的维甲酸受体配体，可能会降低基于维甲酸受体配体的药物的副作用。
　　 本文通过对化合物库进行筛选发现海洋天然产物Luffariellolide是一种新型的维甲酸受体激动剂，并且阐述了这种配体特异性识别维甲酸受体的分子机理。Luffariellolide化学本质为二倍半萜，与全反式维甲酸类似，由一条疏水的碳链和一个三甲基环己烯基团组成。但是关键位置的基团两者完全不同。全反式维甲酸为丁烯酸（羧基），而在Luffariellolide的相应位置上则为γ-羟基丁烯酸内酯环。这个区别是极其重要的，是药物研发新策略的关键所在。虽然与已知的维甲酸类配体的结构不同，但Luffariellolide既可促进辅激活因子与维甲酸受体的结合，又可以调控维甲酸受体的靶基因表达。又进一步通过细胞生物学实验发现Luffariellolide能够通过维甲酸受体抑制多种肿瘤细胞的生长，而且能够抑制对维甲酸有耐药性的结肠癌细胞的增殖。因此，本研究表明该类海洋天然产物能够提供一种设计策略以研发用于抑制肿瘤生长并且有效改善耐药性的药物，对与维甲酸受体相关疾病的治疗具有重要意义。

目录

声明

摘要

前言

1．1 核受体简介

1．1．1 核受体的分类与命名

1．1．2 核受体的结构与功能

1．2 维甲酸受体研究进展

1．2．1 维甲酸受体的结构

1．2．2 维甲酸受体的转录激活机制

1．2．3 维甲酸受体的功能研究进展

1．3 Luffariellolide

1．3．1 Luffariellolide简介

1．3．2 Luffariellolide与维甲酸类化合物的比较

1．4 本研究的目的与意义

2 材料与方法

2．1 常用药品、试剂与耗材

2．2 细胞培养

2．2．1 细胞株

2．2．2 细胞常规培养

2．3 分子克隆相关方法

2．3．1 载体与质粒

2．3．2 质粒构建

2．4 目的蛋白质的表达与纯化

2．4．1 RARα LBD蛋白表达

2．4．2 RARα LBD蛋白纯化

2．4．3 聚丙烯酰胺凝胶电泳

2．5 辅因子结合实验

2．6 瞬时转染实验

2．7 MTT法检测Luffariellolide抑制癌细胞增殖活性

2．8 应用流式细胞术检测Luffariellolide对细胞周期的影响

2．9 RT-PCR法检测基因表达水平的变化

2．9．1 细胞总RNA的提取

2．9．2 RNA反转录生成cDNA

2．9．3 荧光定量PCR检测

2．10 数据统计与分析

3 结果与讨论

3．1 实验结果

3．1．1 RARα特异性激动剂Luffariellolide的发现

3．1．2 Luffariellolide是泛维甲酸受体激动剂

3．1．3 Luffariellolide抑制癌细胞的增殖活性

3．1．4 Luffariellolide对癌细胞细胞周期的影响

3．1．5 Luffariellolide对癌细胞基因表达的调控

3．1．6 Luffariellolide对具有维甲酸耐药性的结直肠癌细胞的作用

3．2 总结与讨论

参考文献

致谢